شناسايي مقاومت مايكوباكتريوم توبركلوزيس به ريفامپين توسط روش PCR

Identifying Mycobacterium Tuberculosis Resistance to Rifampin by Multiplex Specific PCR Method

زمينه و هدف: مايكوباكتريوم توبركلوزيس همچنان به‌عنوان شايع‌ترين علت مرگ‌هاي مرتبط با عوامل بيماريزاي عفوني در جهان مطرح است. ريفامپين نيز از مهم‌ترين داروهاي خط اول درمان بيماري سل مي‌باشد. شايع‌ترين موتاسيون‌هاي مرتبط با مقاومت به داروي ريفامپين در مايكوباكتريوم توبركلوزيس بر اثر جابه‌جايي در كدون‌هاي 531، 526 و 516 در ژن rpoB اتفاق مي‌افتد. اين مطالعه با هدف معرفي روش (Multiplex Allele Specific) PCR براي شناسايي بيماران مبتلا به سل مقاوم به ريفامپين از طريق يافتن موتاسيون‌هاي ايجادشده در ژنrpoB صورت گرفت. روش بررسي: در اين پژوهش، وجود جهش در 3 كدون ژن rpoB در 90 نمونه كشت مثبت بيماران مسلول ريوي مراجعه‌كننده به مركز تحقيقات مايكوباكتريولوژي واقع در بيمارستان مسيح دانشوري تهران در سال‌ 1387-1385 پس از انجام تست‌هاي حساسيت دارويي، بررسي گرديد. براي ارزيابي جهش در 3 كدون 531، 526 و 516 از روش MAS-PCR استفاده شد. يافته‌ها: براساس نتايج كشت، 3/33% از نمونه‌ها حساس و 6/66% مقاوم به دارو بودند كه از اين ميزان نمونه مقاوم به دارو، 4/44% مقاوم به ريفامپين بودند. با استفاده از روشMAS-PCR ، 2/32% از اين مقاومت‌ها شناسايي گرديد كه 4/43% داراي موتاسيون در كدون rpoB531، 5/34% داراي موتاسيون در كدونrpoB526 و 31% داراي موتاسيون در كدون rpoB516 بودند. نتيجه‌گيري: نتايج اين مطالعه نشان داد روشMAS-PCR ، روشي دقيق و مناسب براي تشخيص سريع مقاومت به ريفامپين در نمونه‌هاي كلينيكي مايكوباكتريوم توبركلوزيس مي‌باشد.

Background and Objectives: Mycobacterium tuberculosis is still considered the most common cause of death cases related to pathogenic infectious factors in the world. Rifampin is among the most important first-line drugs to treat tuberculosis. The most common mutations in resistance to Rifampin occur due to the displacements in Codons 531, 526, and 516 in rpoB gene. This study was carried out with the aim of introducing the method (Multiplex Allele Specific) PCR in order to identify tuberculosis patients resistant to rifampin through detecting mutations in the rpoB gene. Methods: In this study, three cases of mutation were evaluated in three Codons of rpoB gene in 90 samples of the positive cases of culture from pulmonary TB patients who had referred to Research Center of Mycobacteriology located in Masih-Daneshvari Hospital of Tehran from 1385 to 1387 after the drug sensitivity test. To examine three codons 531, 526 and 516, MAS PCR method was used. Results: The results of the culture showed that 33.3% of the samples were sensitive and 66.6% were resistant to drugs of which 44.4% were resistant to Rifampin. By using MAS PCR method, 32.2% of these cases of resistance were identified. Among these cases, 43.4% had mutation in codon rpoB 531, 34.5% in rpoB 526 codon and 31% in rpoB 516 codon. Conclusion: Based on the results of this study, MAS PCR method used in this research is an accurate and appropriate method to rapidly diagnose resistance to Rifampin in the clinical samples of Mycobacterium tuberculosis.