ويژگي هاي فنوتيپي و ژنو تيپي جدايه‌هاي Erwinia amylovora از ميزبان هاي مختلف در شيراز

Phenotypic and Genotypic Characteristics of Erwinia amylovora Isolates from Different Hosts in Shiraz City

از اواخر فروردين سال 1385 تا شهريور سال 1386 باغات ميوه مناطق مختلف شيراز مورد بازديد قرار گرفتند و از درختان سيب، به و گلابي داراي علايم سوختگي آتشي نمونه‌برداري شد. تعداد چهل وهفت جدايه باكتري با استفاده از محيط¬كشت¬هاي آگار غذايي از بافت¬هاي آلوده جدا و براساس آزمون¬هاي استاندارد باكتري¬شناسي به¬عنوان Erwinia amylovora تشخيص داده شدند. جدايه‌ها از نظر خصوصيات فنوتيپي، بيماري¬زايي، اندازه قطعات DNA تكثير شده در حضور آغازگر اختصاصي A/B در واكنش زنجيره¬اي پلي‌مراز (PCR) و تنوع نقوش حاصل از محصولات واكنش rep-PCR با سه آغازگر REP، ERIC و BOX مورد مقايسه قرار گرفتند. كليه جدايه¬ها گرم منفي، اكسيداز منفي، كاتالاز مثبت و بي‌هوازي اختياري بودند. روي محيط كشت آگار غذايي پرگنه¬هاي براق، گرد، محدب و كرم رنگ و روي محيط CCT پرگنه¬هاي آبي كم¬رنگ، براق با حاشيه مشخص ايجاد كردند. جدايه¬ها قادر به ايجاد واكنش فوق حساسيت در توتون، توليد لوان، ذوب ژلاتين، توليد استوئين و توليد مواد احياء¬كننده از ساكاروز بودند ولي هيچ¬يك از جدايه¬ها قادر به توليد رنگدانه فلورسنت روي محيط¬كشت YDC، هيدروليز توئين، هيدروليز ژلاتين، توليد لستيناز، رشد در 39 درجه سلسيوس و توليد اوره¬آز نبودند. اكثر جدايه¬ها در آزمون تصاعد گاز از گلوكز واكنش مثبت نشان دادند. در مايه¬زني روي نهال¬هاي سيب، به و گلابي علايم خشكيدگي در برگ¬ها و سرعصايي شدن دم¬برگ¬ها پس از سه هفته ايجاد شد و در مايه¬زني ميوه¬هاي نارس گلابي لكه¬هاي قهوه¬اي تا سياه در اطراف ناحيه مايه¬زني شده ايجاد گرديد. در آزمون PCR، تمام جدايه¬ها كه بر اساس آزمون¬هاي باكتري¬شناسي و بيماري¬زايي به¬عنوان E. amylovora تشخيص داده شده بودند با جفت آغازگر اختصاصي A/B قطعه قابل انتظار 1000 جفت بازي را توليد كردند.در واكنش rep-PCR يازده جدايه نماينده كه بر اساس آزمون¬هاي باكتري¬شناسي، بيماري¬زايي و واكنش زنجيره¬اي پلي¬مراز به¬عنوان E. amylovora تشخيص داده شده بودند قطعات متفاوتي از لحاظ اندازه توليد كردند. نتايج حاصل از تجزيه و تحليل آماري داده¬ها نشان‌دهنده همگن بودن جدايه¬هاي اين باكتري از ميزبان¬هاي مختلف مي¬باشد.

During 2007 - 2008 different fruit gardens in Shiraz (Fars Province, Iran) were surveyed for samples being collected from infected apple, pear and quince trees. Symptoms of the infected trees included water soaking of infected tissue, wilt and tissue necrosis, scorched and blackend of blossom bracts or young shoots. A total of 47 strains were isolated from infected trees using NA medium. On the basis of standard physiological, biochemical and nutritional tests the isolates were identified as Erwinia amylovora. The isolates were compared through physiological and biochemical characters, pathogenicity test, polymerase chain reaction (PCR) and rep- PCR. The isolates were gram and oxidase negative, catalase positive and facultative anaerobs with shiny smooth cream colonies on NA and translucent, smooth, large, light blue with entire margin colonies on CCT medium. All isolates induced hypersensitive reaction on tobacco, produced levan and acetoin and reduced substances from sucrose but were negative in induced potato soft rot and fluorescent pigment production on KB medium, pink pigment on YDC medium, reduction of nitrate, growth at 39°C and urease. Wound inoculation of bacterial suspension into apple pear and quince seedlings led to the slight formation of wilting, necrosis and chlorosis as well as necrosis of leaves and shephered crook at the tip, after a passage of three weeks. In PCR assay, 47 isolates identified as E. amylovora, produced predicted lOOObp with A/B specific primers. In rep-PCR assay, representative strains identified as E. amylovora, produced different fingerprints in weight with REP, ERIC and BOX primers. The results of this study demonstrated that E. amylovora strains isolated from different hosts in Shiraz Province are genotypically homogenous.