بررسي تنوع ژنتيكي قارچ عامل بيماري آنتراكنوز گردوOphiognomonia leptostyla (Fr.) Sogonov در منطقه ITS و IGS با استفاده از نشانگر CAPS در شمال غرب ايران

بررسي تنوع ژنتيكي قارچ عامل بيماري آنتراكنوز گردوOphiognomonia leptostyla (Fr.) Sogonov در منطقه ITS و IGS با استفاده از نشانگر CAPS در شمال غرب ايران

به منظور ارزيابي تنوع ژنتيكي قارچ عامل بيماري آنتراكنوز گردو Ophiognomonia leptostyla در شمال غرب ايران تعداد 25 جدايه از مناطق مختلف جمع آوري و با استفاده از روش تك اسپورسازي خالص شدند. استخراج DNA از ميسليوم قارچ با استفاده از روش ليو و همكاران انجام شد. تكثير منطقه ITS-rDNA توسط جفت آغازگر اختصاصي، ITS1 و ITS4 انجام گرديد. هم‎چنين منطقه IGS-rDNA با استفاده از جفت آغازگر NS1R و LR13R تكثير شد. نوارهايي به طول 600 جفت باز و 2320-2300 جفت باز از تكثير منطقه ITS و IGS به دست آمد. قطعات تكثير شده توسط پنج آنزيم برش دهنده EcoRI، HindIII، TagI، HinfI و BamHI مورد هضم قرار گرفتند. از مجموع آنزيم هاي برشي مورد استفاده EcorI، TagI و BamHI فاقد محل برش بر محصولات تكثيري منطقه ITS و HinfI و BamHI نيز فاقد محل برش بر محصولات تكثيري منطقه IGS بودند. گروه بندي جدايه هاي مورد مطالعه بر اساس الگوهاي نواري هر دو منطقه در سطح شباهت 75 درصد، آن‎ها را در چهار گروه طبقه بندي نمود.

Genetic diversity of Ophiognomonia leptostyla, walnut anthracnose casual agent in northwest of Iran was studied. 30 isolates were collected from different regions and purified as single spore cultures. DNA extraction from fungi mycelium was carried out. The ITS-rDNA region amplified with ITS1 and ITS4 primers. The IGS-rDNA region was amplified by NS1R and LR13R primers. Bands with 600 and 2300-2320 bp length were obtained in ITS and IGS amplification, respectively. Amplified fragments were digested by EcorI, HindIII, TagI, HinfI and BamHI restriction enzymes. EcorI, TagI and BamHI had no restriction site on amplified ITS region and HinfI and BamHI had no restriction site on IGS region. All isolates were grouped in four clusters based on ITS and IGS CAPS with 75% similarities.