تخليص و تعيين خصوصيات فعال كننده فاكتور X انعقاد خون از زهر افعي لبتيناي ايراني

تخليص و تعيين خصوصيات فعال كننده فاكتور X انعقاد خون از زهر افعي لبتيناي ايراني

زمينه و هدف: زهر مارها به ويژه زهر مارهاي خانواده ويپريده (افعي ها ) و كروتاليده حاوي تركيباتي هستندكه مي توانند روي انعقاد خون اثر بگذارند. هدف از اين مطالعه جداسازي فعال كننده اختصاصي فاكتور خوني انعقادي X از زهر افعي لبتيناي ايران مي باشد. روش بررسي: دويست ميلي گرم زهر خام افعي لبتيناي ايران به وسيله كروماتوگرافي ژل فيلتراسيون روي سفادكس G-100 برده شد. سپس فراكسيون حاوي فعال كننده فاكتورX به وسيله كروماتوگرافي تعويض يون روي ستون دي اتيل امينواتيل، سلولز (DEAE-52) برده شد. در مرحله آخر فراكسيون حاوي فعال كننده فاكتورX حاصل از مرحله دوم كروماتوگرافي دوباره به وسيله كروماتوگرافي تعويض يون روي ستون دي اتيل امينواتيل، سلولز( DEAE-52) اما با PH متفاوت برده شد. يافته ها: فعال كننده جدا شده يك باند پروتييني را روي سديم دودسيل سولفات، پلي اكريل اميد ژل( SDS-PAGE ) در شرايط غير احياي نشان داد. وزن مولكولي آن به وسيله SDS–PAGE ؛ 78000 دالتون تخمين زده شد. فعال كننده در حضور يون كلسيم( ) فاكتور انعقادي X را به فاكتور X فعال شده( xa ) تبديل مي كند و روي پروترومبين و فيبرينوژن تاثيري ندارد. فعال كننده، روي سوبستراي فاكتور Xa يعني بنزوييل، ايزولوسيل، گليسيل، ارژينيل، پارانتيروآنيليد( S-2222) فعاليت اميدو ليتيك ندارد. روي سوبستراي بنزوييل ارژينين اتيل استر(BAEE) فعاليت آرژينين استرازي ندارد. نتيجه گيري: باتوجه به نتايج به دست آمده به نظر مي رسد كه فاكتور استخراج شده براي فاكتور X اختصاصي باشد. م ع پ 1390؛‌10(4):416-403

Background and Objective: Snake venom particulary those belonging to Crotalidae and viperidae families, are known to contain number of components affecting blood coagulation. The Aim of this paper is to describe the isolation a specific blood coagulation factor X activator from the crude venom of Iranian Vipera lebetina. Material and Methods: Factor X activator was purified from two hundred mg of crude venom by gel filtration on sephadex G-100 and two step ion-exchange chromatography on DEAE-cellulose (DEAE-52). Results: It showed a single band in sodium dodecyl sulfate – polyacrylamid gel electrophoresis (SDS-PAGE) in non-reducing condition .The mol.wt was estimated to be 78000Da by SDS-PAGE the activator, activated factor X to Xa in presence of calcium ions. It could not activate prothrombin, no had effect an fibrinogen and thus appeared to act specifically on factor X. The activator no amidolytic activtiy on factor Xa substrate benzoyl-Ile – glu – Gly – Arg-p-nitracnilide (S-2222). It had no arginine esterase activity toward substrate benzoyl-agrinine ethylester (BAEE) while crude venom hydrolyzes this substrate. Conclusion: The results of this study showed that The activator do act specifically on factor X. Sci Med J 2011; 10(4):403-416