مقايسه و ارزيابي توليد پروتيين‎هاي دفعي- ترشحي پروتواسكولكس اكينوكوكوس گرانولوزوس در محيط‎هاي كشتRPMI ، DMEM و PBS غني شده با گلوكز

Comparison and Evaluation of Echinococcus granulosus Protoscoleces Excretory/Secretory Proteins in PBS Complemented with Glucose, DMEM and RPMI Culture Media

زمينه و هدف: تهيه آنتي‎ژن مناسب از موضوعات مهم در زمينه‌ي تشخيص سرولوژيك هيداتيدوز مي‌باشد. پژوهشگران با كشت كوتاه مدت پروتواسكولكس‎ها در چند محيط مختلف توانسته‎اند به آنتي‎ژن‎ها‌ي دفعي- ترشحي دسترسي پيدا كنند. با اين‌حال تاكنون مقايسه‎اي در خصوص ميزان توليد اين آنتي‌ژن‌ها در محيط‎هاي مختلف انجام نشده است. در اين پژوهش، ميزان توليد پروتيين‌هاي (آنتي‌ژن‌هاي) دفعي- ترشحي از طريق كشت كوتاه مدت پروتواسكولكس‎ها در محيط‌هايRPMI ، DMEM و PBS غني‌شده با گلوكز مورد مطالعه قرار گرفتند. روش بررسي: براي تهيه‌ي پروتيين‌‌هاي دفعي- ترشحي، پروتواسكولكس‎هاي اكينوكوكوس در محيط‌هاي RPMI، DMEM وPBS غني‌شده با گلوكز به مدت 72 ساعت كشت داده شدند. پس از تغليظ و سنجش پروتيين‎هاي توليد شده، به منظور شناسايي اجزاي مختلف آن‌ها، با روش SDS-PAGE الكتروفورز شدند. داده‎ها از طريق آزمون‌هاي آماري آناليز واريانس يك‌طرفه و توكي تجزيه و تحليل شدند. يافته‌ها: ميانگين غلظت پروتيين‎هاي دفعي- ترشحي در زمان 24 ساعته‌ي كشت در محيط PBS(8/16 ميكروگرم در ميلي‌ليتر) نسبت به RPMI (4/7 ميكروگرم در ميلي‌ليتر) و DMEM (3/10 ميكروگرم در ميلي‌ليتر) به‌طور معني‎داري بيشتر بود (05/0(P < ، در حالي‌كه اين تفاوت بين غلظت پروتيين‎هاي دفعي- ترشحي در محيط RPMI و DMEM مشاهده نشد. پروتيين‎هاي دفعي- ترشحي به‌دست آمده از محيط PBS به 12 باند اصلي و محيط‎هاي RPMI و DMEM هر كدام به 14 باند اصلي در محدوده‌ي وزن ملكولي 16 تا 67 كيلودالتون تفكيك شدند. نتيجه‌گيري: براي تهيه‌ي پروتيين‌هاي دفعي- ترشحي پروتواسكولكس، محيط PBS غني‌شده با گلوكز نسبت به دو محيط ديگر مناسب‌تر است. حداكثر زمان مناسب براي توليد اين پروتيين‎ها، تا 48 ساعت بعد از كشت اوليه پروتواسكولكس‌ها مي‎باشد.

Background and Objective: Preparation of proper antigens is an important issue in serology of hydatidosis. Investigators have been able to obtain excretory/secretory antigens (E/S Ags) by short-term culture of protoscoleces in a couple of culture media. However, no data are available about production rate of such antigens in different culture media. The present study was carried out to evaluate the production of E/S Ags (proteins) in PBS complemented with glucose, DMEM and RPMI culture media. Material and Methods: To obtain E/S proteins, protoscoleces of echinococcus were cultured in PBS complemented with 10% glucose, RPMI and DMEM for 72 hours. Proteins secreted in culture media were concentrated and assayed. To characterize different components, proteins were electrophoresed on SDS- PAGE. Data were analyzed using One-way ANOVA and Tukey HSD tests. Results: The mean concentration of E/S proteins in PBS medium in 24 hours of culture was significantly higher than DMEM and RPMI (P<0.05). However, such a difference was not observed between E/S proteins in DMEM and RPMI media. E/S proteins obtained from PBS medium were separated into 12 major bands and the two other media into 14 major bands within a range of molecular masses of 16 to 67 kDa. Conclusion: PBS complemented with glucose is more appropriate than the two other media for E/S proteins production. The best time to obtain E/S proteins is the first 48 hours of culture.