نوين‌ترين روش استخراج دزوكسي نوكلييك اسيد پاتوژن‌هاي غذايي به وسيله ذوب و انجماد سلولي (ازت مايع)

نوين‌ترين روش استخراج دزوكسي نوكلييك اسيد پاتوژن‌هاي غذايي به وسيله ذوب و انجماد سلولي (ازت مايع)

باكتري استافيلوكوكوس يكي از شايع‌ترين ميكروب‌هاي مواد غذايي، خصوصا لبنيات بوده و از مهم‌ترين عفونت‌هاي بيمارستاني بوده كه سبب عوارض متعددي در انسان در سيستم گوارشي ـ پوستي و… مي‌گردد لذا تشخيص سريع اين پاتوژن از مسايل حايز اهميت در جوامع امروزي بوده يكي از مواد اوليه جهت تشخيص، وجود DNA باكتري بوده كه در اين طرح پژوهشي از متدهاي متعددي جهت ليز ديواره سخت باكتري gr+ مذكور استفاده شد كه روش انجماد در ازت مايع oc 196- سريع‌ترين و كم‌هزينه‌ترين روش‌هايي بود كه مي‌توان جايگزين ليز آنزيمي نمود در اين راستا بعد از كشت باكتري، و انجماد در ازت مايع و خردكردن در هاون چيني اتوكلاو شده و اضافه نمودن كلرورسديم و SDS و غيره و در نهايت افزودن ايزوپروفايل الكل و شستشو با الكل 70% و حذف پروتيين‌هاي زايد و تركيبات ناخالص، تخليص DNA با راندمان عالي انجام گرفت بدون اينكه از هرگونه آنزيم شيميايي استفاده گردد. جهت انجام واكنش زنجيره‌اي پلي‌مراز باكتري استافيلوكوكوس به آنزيم‌هايي همچون موتيلازين- ليزوستافين- ليزوزيم و غيره اشاره نمود كه با توجه به شرايط زماني انجام يك پروسه، دسترسي به آنها جهت ليز سلولي امري دشوار و پرهزينه مي‌باشد. دراين تحقيق پژوهشي روش‌هاي متعددي همچون freeze-Thaw – sonicatar ازت مايع استفاده گرديد كه در بين اين روش‌ها بهترين راندمان مربوط به ازت مايع oc 196- بود. با توجه به عدم استفاده از هرگونه آنزيم‌هاي گران‌بها جهت ليز سلولي و سرعت زمان انجام اين پروسه كه برابر نيمي از زمان اثر يك ماده آنزيمي گران‌بها مي‌باشد، مي‌توان اين روش را كه در مدت زمان تقريبي 30/1دقيقه الي 2 ساعت انجام پذير است روش جايگزيني جهت DNA Extraction by enzyme داشت

The Staphylococcus bacteria is commonest food microbes specially in dairy and also it is most important infections of hospitals that cause to dermatological and intestinal diseases in human. Then now days the rapid recognizing of this bacteria, has a vital importance. One of the fundamental materials for recognizing is bacteria DNA that in this research used various methods for lysing the staff membranes of gram positive bacteria. Freezing in 196oc liquid nitrogen is most rapid and economical method that could be use instead of enzyme lyses method. In this way after the culturing the bacteria and freezing in liquid nitrogen and crashing in , it is ready to autoclave and adding NACL and SDS and etc. finally Iso profile alcohol will be add and then washing with %70 alcohol and omitting the extra proteins and non pure components. DNA extraction done with high potential and didn’t used any chemical enzymes. It could be indicate to metylyzine, lysostafine, lyzozyme and … for Staphylococcus bacteria reaction that in research condition using of above enzymes could be expensive and difficult. In this research used different methods as freeze-thaw and sonicatar but Freezing in 196 oc liquid nitrogen is the best. By mention to expensive cost of chemical enzymes and rapid time of this process that is done in half time(90min to 2 hour), this method recommend as instead method for DNA extracting by enzymes.