جداسازي سلول هاي بنيادي و پيش ساز عصبي از مغز موش بالغ با روش ايجاد نوروسفر

جداسازي سلول هاي بنيادي و پيش ساز عصبي از مغز موش بالغ با روش ايجاد نوروسفر

زمينه و هدف: سلول هاي بنيادي دسته اي از سلول هاي تمايز نيافته مي باشند كه قابليت تمايز به انواع سلول هاي تخصص يافته را دارند. كشف اين سلول ها در سيستم عصبي مركزي پستانداران كه تا مدتها پيش تصور مي شد فاقد هرگونه قدرت ترميم و بازسازي مي باشد، اميدهاي تازه اي را براي درمان بيماري هاي دژنراتيو سيستم عصبي مركزي نظير سكته مغزي، بيماري پاركينسون، آلزايمر و ضايعات نخاعي ايجاد نموده است. بدليل اهميت موضوع، تصميم گرفته شد نحوه جداسازي سلول هاي بنيادي عصبي از مغز موش بالغ با استفاده از روش ايجاد نوروسفر و تمايز آنها به سلول هاي بالغ سيستم عصبي توضيح داده شود. روش كار: ناحيه تحت بطني نيمه سري بطن هاي طرفي مغز موش بالغ تشريح و جداسازي شده و پس از ايجاد سوسپانسيون تك سلولي بر اساس روش ايجاد نوروسفر كشت داده شد. پس از هفت روز نوروسفرهاي اوليه حاصله شمارش شده و ميانگين تعداد آنها بدست آمد. تمايز سلول هاي بنيادي عصبي به سلول هاي بالغ سيستم عصبي با قرار دادن سلول هاي بدست آمده از نوروسفرها در محيط كشت تمايزي انجام شد و بمنظور تشخيص اين سلول ها از تكنيك ايمونوسيتوشيمي و نشانگرهاي اختصاصي آنها استفاده شد. يافته ها: سوسپانسيون سلولي بدست آمده از بافت تحت بطني نيمه سري بطن هاي طرفي مغز موش بالغ 7 تا 10 روز پس از انكوبه شدن در محيط كشت نوروسفر، كلوني هاي چند ظرفيتي بنام نوروسفر ايجاد نمود. ميانگين تعداد نوروسفرهاي بدست آمده از اين ناحيه 62±505 تخمين زده شد. خاصيت چند ظرفيتي نوروسفرهاي بدست آمده با قرار گرفتن سلول هاي حاصله از نوروسفرها در محيط كشت تمايزي با ايجاد سلول هاي اصلي سيستم عصبي مركزي يعني نورون، آستروسيت و اليگودندروسيت نشان داده شد. نتيجه گيري: به دليل كمبود ماركرهاي خاص براي شناسايي سلول هاي بنيادي عصبي روش ايجاد نوروسفر در محيط آزمايشگاهي روشي مطمين و انتخابي براي جداسازي، مطالعه و درك بيولوژي سلول هاي بنيادي عصبي روياني و بالغ مي باشد.

Background &Objectives: Stem cells are a class of undifferentiated cells that are able to differentiate into specialized cell types. The discovery of such cells in the adult mammalian central nervous system (CNS), an organ traditionally thought to have little or no regenerative capacity, opened the door to treatment of degenerative diseases of CNS like Stroke, Parkinson, Alzheimer and Spinal Cord Injury. Thus, here we described the isolation of neural stem cells from the adult mouse brain using the neurosphere assay (NSA) and differentiation of these cells to neural adult cells in details. Methods: The rostral part of the subventricular zone (SVZ) of the lateral ventricles in the adult mice was dissociated into single cell suspension and cultured using NSA. Primary neurospheres were counted seven days after plating and then the mean number of neurospheres was recorded. The differentiation of neural stem cells into adult neural cells was accomplished by plating the neurosphere-derived cells in differentiating media. Immunocytochemistry and specific markers were used for the identification of the adult neural stem cells. Results: The cell suspension obtained from the rostral part of the SVZ of the lateral ventricles generated multipotential colonies, called neurospheres, 7 to 10 days post- incubation. The mean number of neurospheres generated from SVZ was 505±62. The multipotentiality of the neurospheres was shown by palting them in differentiating media and generating adult neural cells including neuron, astrocyte and oligodendrocyte. Conclusion: Owing to their rarity and paucity of neural stem cell specific markers, the NSA is a common and selective method for isolating and understanding the biology of embryonic and adult neural stem cells.