مقايسه ميزان ترانسفكشن سلول‌هاي آدهرنت 293 HEK با دو روش كلسيم فسفات و ليپوزوم

Comparison of transfection rate of HEK293 cells with CaPO4 and liposome-mediated gene transfer

تكنيك‌هاي متعددي جهت انتقال ژن به سلول‌هاي جانوري در كشت سلولي وجود دارد. از مهم ترين ويژگي‌هاي يك ترانسفكشن مفيد، اين است كه در عين ساده بودن قادر باشد ميزان بالايي از سلول‌ها را ترانسفكت نمايد. روش‌هاي شيميايي هم چون ليپوزوم و يا كلسيم فسفات مثالي از اين روش‌ها مي‌باشد. هدف از اين پژوهش انتخاب يك روش مناسب جهت كاهش اتلاف زمان و هزينه مي‌باشد.در اين تحقيق با استفاده از تكنيك‌هاي فوق بهينه سازي ترانسفكشن بر روي سلول‌هاي آدهرنت293 HEK صورت گرفته، سپس رنگ آميزي سلول‌هاي ترانسفكت شده با كيت اختصاصي انجام گرفت. نتايج اين تحقيق ميانگين ترانسفكشن 55 درصد براي روش ليپوفكتامين و با روش كلسيم فسفات ميانگين 80 درصد را نشان داد. با آزمون نسبت، مشخص شد كه بين ترانسفكشن سلول‌هاي 293 HEK با دو روش ليپوفكتامين و كلسيم فسفات اختلاف معني دار وجود دارد(001/0 > (Pvalue. به اين ترتيب روش كلسيم فسفات از نظر ميزان ترانسفكشن سلول ها‌، هزينه‌، تكرار نتايج و راحت بودن بهينه سازي براي سلول‌هاي آدهرنت مناسب مي‌باشند

There have been various techniques for gene delivery to animal cells. The most important feature of transfection is high efficiency as well as being easy to apply. Chemical-based transfection can be divided into several kinds. Among them are liposomes and calcium phosphate. In this study we have optimized calcium phosphate and liposome mediated gene transfer to adherent cells HEK293 . Then staining of transfected cells have been done using specific kit. The rate of transfection of HEK 293 cells has been achieved by counting transfected cells. The result has shown 55% transfection for liposome mediated and 80% for calcium phosphate method. There have been significant distance between calcium phosphate and liposome mediated gene transfer to HEK293 cells (Pvalue=0.0001). According to our result, in comparison with liposome mediated gene transfer, the calcium phosphate method is very efficient, cheap, easy to apply and reliable method to adherent animal cells. The selection of suitable method from the beginning of study can reduce wasting of time and cost in experiments.