مطالعه حضور ژن‌هاي انتروتوكسي ژنيك hblC, hblD كمپلكس HBL در باسيلوس سريوس‌هاي جدا شده از برنج‌هاي پر مصرف در ايران با روش PCR

Study of enterotoxigenic hblC , hblD genes of HBL complex in Bacillus cereus isolated from Iranian rice samples by PCR

باسيلوس سريوس باكتري گرم مثبت، اسپور زايي است كه دو نوع مسموميت غذايي به صورت اسهال و تهوع را ايجاد مي‌نمايد. بيماري تهوعي توسط سه توكسين‌هاي هموليزين BL (HBL)، غير هموليتيك (NHE) و سايتوتوكسين K ايجاد مي‌شود .هموليزين BL يك توكسين منحصر به فرد، قوي و سه جزيي است، متشكل از : جزي اتصالي، B و دو جزي ليتيك يعني L2 , L1 . برنج معمولا به باسيلوس سريوس آلوده است، با توجه به اين كه اين باكتري مي‌تواند دماي بالاي پخت برنج را تحمل نمايد، اسپورها مي‌توانند باقي مانده و جوانه زنند .هدف از اين مطالعه شناسايي ژن‌هاي انتروتوكسين hblC، hblD در باسيلوس سريوس‌هاي جدا شده از برنج‌هاي پر مصرف در ايران است. در اين مطالعه 10 نمونه مختلف برنج از نظر حضور باسيلوس سريوس‌هاي انتروتوكسيژنيك مورد بررسي قرار گرفتند. جداسازي باسيلوس سريوس با استفاده از محيط انتخابي فنل رد آگار (مانيتول، زرده تخم مرغ وسولفات پلي ميكسين B (PEMPA)) و تاييد باسيلوس سريوس به روش PCR انجام گرفت. نتايج مشخص نمود كه همه نمونه‌هاي برنج، آلوده به باسيلوس سريوس بوده ولي ژن‌هاي hblC,hblD تنها در چهار نمونه (40%) مشاهده گرديد.

Bacillus cereus is a gram-positive, spore forming bacteria which behaves as an opportunistic pathogen frequently causing gastrointestinal diseases. This bacterium is associated with emetic and diarrheal types of foodborne illness. The diarrhoeal illnesses can be caused by hemolysin BL (HBL), non-hemolytic (NHE) and cytotoxin K. Haemolysin BL is a unique and potent three component pore forming toxin composed of a binding component, B, and two lytic components, L1 and L2. Rice is commonly contaminated with B. cereus. By considering the fact that this bacterium is able to tolerate high temperature in the cooked rice, the spores are able to be germinated. The aim of this study is to detect enterotoxigenic B. cereus by hblC and hblD genes. ten different samples of rice were analyzed for the presence of enterotoxigenic B. cereus. Isolation of B. cereus was done by selective plating on PEMPA. Following the biochemical tests, PCR method has been applied for confirming Bacillus cereus. Then, PCR reaction have been applied to detect enterotoxigenic hblC and hblD genes. The results have shown that all rice samples were contaminated with B. cereus but hblC and hblD genes was found in only 4 (40%) strains. Despite its common dietary role, rice in Iran has rarely been investigated from a microbiological point of view. This was the first time that enterotoxigenic Bacillus cereus isolated from rice of Iran is differentiated by hblA and hblD genes. . We can also offer our data to health organization by the aim of decreasing food borne illnesses.