تاثير تراكمهاي مختلف بتا- گلوكان برسنتز پرولاكتين در ياخته هاي GH3/B6 و بررسي گيرنده بتا- گلوكان در اين ياخته ها

The effect of different concentrations of β- glucan on intracellular prolactin synthesis in GH3/B6 cells and its receptor, Dectin-1

پرولاكتين هورموني پلي پپتيدي است كه از هيپوفيز پيشين ترشح مي شود و عملكرد اصلي آن? تحريك سنتز شير(لاكتاسيون) است. اخيراً نقش پرولاكتين در سيستم ايمني توجه پژوهشگران را به خود جلب كرده است. در بخش اول اين مطالعه، اثر ?- گلوكان بر سنتز پرولاكتين بررسي شده است . نقش ?- گلوكان كه يك پليمر گلوكز است در تحريك سيستم ايمني نيز در مطالعات متعددي گزارش شده است. در اين بررسي از سلولهاي GH3/B6 كه هورمونهاي پرولاكتين و رشد را سنتز و ترشح مي كنند استفاده گرديده است. در بخش دوم، هدف شناسايي گيرنده اين پلي ساكاريدها، دكتين-1، در اين سلولها بوده است. گيرنده دكتين-1 در انواع مختلفي از سلولهاي ايمني و غير ايمني بيان مي شود. مقدار پرولاكتين داخل سلولي با استفاده از ليز سلولها و توسط كيت اليزا سنجيده شد. سلولها با غلظتهاي 5، 150 و250 ميكروگرم بر ميلي ليتر ?- گلوكان به مدت 48 ساعت تيمار شدند. از TRH (50نانومولار) به عنوان كنترل مثبت و دكستران (150 ميكروگرم بر ميلي ليتر) به عنوان كنترل منفي استفاده گرديد. به منظور شناسايي گيرنده، RNA سلولهاي GH3/B6 تحت تاثير محرك و بدون محرك استخراج شد. از بافت طحال كه بيان اين گيرنده در آن گزارش شده است به عنوان بافت كنترل استفاده گرديد. بيان گيرنده دكتين-1 در اين سلولها با استفاده از روش RT-PCR و PCR مطالعه شد. نتايج به دست آمده نشانگر آن است كه غلظتهاي 150و 250 ميكروگرم بر ميلي ليتر ?- گلوكان ميزان پرولاكتين داخل سلولي را به طور معني داري نسبت به نمونه كنترل افزايش مي دهند( P < 0/001وP < 0/05). نتايج حاصل همچنين نشان مي دهند كه ?- گلوكان از طريق گيرنده اختصاصي خود، دكتين-1 اثر تحريكي خود را بر سلولهاي GH3/B6 اعمال مي كند به گونه اي كه بيان اين گيرنده در حضور ?- گلوكان به ميزان چشمگيري افزايش مي يابد .

Prolactin is a polypeptide hormone of the anterior pituitary gland that was originally named for its ability to promote lactation. Today we know that it has over 300 different function in vertebrates including osmoregulation, growth and development, metabolism, behavior, reproduction and immunoregulation. Recently, the role of Prolactin in immune system is investigated. Glucans are glucose polymers that are major constituents of the cell wall of fungi, plant and certain bacteria. In the present study, we used GH3/B6 cell line which is known to secrete Prolactin and growth hormone. We also studied the expression of ?-glucan receptor, dectin-1, on this cells. Intracellular Prolactin levels were assayed by ELISA. Cells were treated with 5,150 and 250?gr/ml concentrations of ?-glucan for incubation time of 48 hours. TRH (50 nM) was used as positive control and dextran (50nM), was our negative control. Therefore, Total RNA was extracted from spleen and GH3/B6 cells in the presence of ?-glucan (250?gr/ml). Then, RT-PCR and PCR methods were done for verifying the expression of Dectin-1. Our result showed that 150 and 250 ?gr/ml concentrations of ?-glucan are capable to stimulation Prolactin synthesis significantly from GH3/B6 cells in comparison with control(P < 0.05). The results showed that spleen, the positive control, expressed Dectin-1 as expected. Our results also showed that Dectin-1 was expressed in GH3/B6 cells at very low level, and this expression was increased under the effect of ?-glucan. Therefore, ?-glucan may induce GH3/B6 cells throughout Dectin-1 which lead increasing prolactin secretion from these cells.