تكثير و تيپ بندي فلاژلين سودوموناس آيروژينوزا به روش مولكولي

Amplification and flagellin typing of pseudomonas aeruginosa by molecular method

مقدمه: سودوموناس آيروژينوزا داراي يك فلاژل قطبي است كه از زيرواحد‌هاي فلاژلين كه توسط ژن fliC كد مي‌گردد ساخته مي‌شود. فلاژلين سويه‌هاي مختلف سودوموناس آيروژينوزا بر اساس واكنش با آنتي‌بادي‌هاي پلي‌كلونال و وزن مولكولي به دو تيپ سرولوژيك a يا b تقسيم مي‌شود.هدف از اين مطالعه تكثير و تيپ بندي فلاژلين سودوموناس آيروژينوزا به روش مولكولي بود. مواد و روش ها: پس از استخراج DNA ژنومي از دو سويه استاندارد M 8821 (فلاژلين تيپ a) و PAO1 (فلاژلين تيپ b) و چند سويه باليني سودوموناس آيروژينوزا، با طراحي يك جفت پرايمر اختصاصي و واكنش زنجيره‌اي پلي‌مراز (PCR)، ژن كامل fliC سويه‌هاي مورد آزمايش تكثير و از نظر طول قطعه ژني مقايسه گرديد. واژه هاي كليدي: سودوموناس آيروژينوزا، ژن فلاژلين، fliC بحث و نتيجه گيري: اين روش مي‌تواند در تشخيص سويه‌هاي فلاژل دار (متحرك) و فاقد فلاژل سودوموناس آيروژينوزا، تكثير كامل توالي ژن fliC به منظوركلون‌سازي و بيان پروتيين فلاژلين نوتركيب كاربرد داشته و همچنين جايگزين روش تيپ بندي سرولوژيك فلاژل باشد. يافته ها: نتايج PCR و تعيين توالي نشان داد كه طول ژن fliCدر سويه‌هاي تيپ a و b متفاوت و به ترتيب bp 1160 و bp 1460 مي‌باشد.

Pseudomonas aeruginosa possesses a polar flagellum made up of flagellin subunits that encoded by fliC gene. Flagellin from several strains of P. aeruginosa on the basis of reaction with polyclonal antibodies and apparent molecular weight was divided into a or b types. Material and Methods: After extraction of the genomic DNA from two standard strains 8821M (Type a) and PAO1 (Type b) and some clinical strains of P. aeruginosa, the full coding sequence of fliC was amplified by polymerase chain reaction (PCR) using the designed specific primers and its fragments length was compared. Results: The PCR and sequencing results showed that the length of fliC genes from the a and b strains were 1160 bp and 1460 bp respectively. Conclusion: This method could be utilized to determine flagellated (Motile) and non-flagellated strains of P. aeruginosa, genotyping, amplification of full coding sequence of fliC gene in order to clone and express recombinant flagellin protein.