بررسي مولكولي فاكتور A-13 انعقادي در بيماران با كمبود ارثي فاكتور 13

Molecular study of coagulation factor ХШ-A among patients with inherited factor XIII-A deficiency

چكيده سابقه و هدف فاكتور13 انعقادي، آخرين آنزيم آبشار انعقادي است و ژن زير واحد A روي كروموزم شش قرار گرفته است. كمبود ارثي فاكتور 13، در حدود 2000000/1 نفر جمعيت رخ مي‌دهد. اين تحقيق با هدف شناسايي جهش‌ها در ژن زير واحد A بيماران و روش غربالگري مناسب ناقلين انجام گرفت. مواد و روش‌ها در يك مطالعه كاربردي، پس از تكميل فرم رضايت‌نامه، نمونه خون از 21 بيمار مبتلا به كمبود فاكتور 13 و خانواده آن‌ها گرفته شد. ابتدا هر اگزون از ژن تكثير داده و سپس با روش الكتروفورز ژل حساس بررسي شد. چنانچه هر اگزون بر روي ژل داراي هترودوبلكس بود، جهت سكانس انتخاب مي‌شد. پس از تعيين موتاسيون، غربالگري ناقلين هر خانواده با روش RFLP صورت گرفت. يافته‌ها جهش‌هاي شناسايي شده شامل دوازده بيمار در اگزون 4 به علت جايگزيني T به جايC، يك بيمار دخول سه تايي G در اگزون 7، دو بيمار با جهش جايگزيني T به جاي C در اگزون 9، سه بيمار جايگزيني G به جاي A در اگزون10 و سه بيمار به علت جايگزيني G به جاي A در اگزون 15 بود. نتيجه گيري نتايج تحقيق نشان داد كه ناحيه مركزي آنزيم نسبت به تغييرات بار الكتريكي و دنباله اسيدهاي آمينه بسيار حساس مي‌باشد، به همين علت جهش‌هاي موثر بر اين ناحيه موجب تغيير شديد فعاليت آنزيم شده است. از طرفي حوزه‌هاي مرتبط با كلسيم اين پروتيين، در ايجاد ساختار چهار زنجيره‌اي نيز به تغييرات نوع اسيد آمينه به علت جهش در ژن بسيار حساس مي‌باشند كه مي‌تواند در غربالگري ناقلين بسيار مفيد باشد.

Abstract Background and Objectives Factor ?? is the last enzyme in the clotting cascade. The gene of A chain is located on chromosome 6. Deficiency of factor ?? in autosomal recessive conditions occurs at a frequency of 1 in 2 million general population. The aim of this study was to detect the mutations of subunit A in both patients and carriers. Materials and Methods In this study we have investigated the molecular basis of inherited F?? deficiency among patients from 21 unrelated Iranian families. Mutation were detected by amplifying each exon. Those exons exhibiting the presence of hetero duplex formation sensitive gel electrophoresis, were selected for direct sequencing. After sequencing, detected mutation was carried out by restriction fragment length polymorphism (RFLP). Results All patients having entered the study had mutations. Twelve patients had homologues substitution of TGG?CGG in exon 4, 1 insertion mutation occurring in exon 7 triple G, 2 patients demonstrated mutation exon 9 ATG? AAG, 3 patients had substitution of CGG? CAG in exon 10, and 3 patients showed a homologue subsituation mutation in exon 15 GCC? GTC. Conclusions Our findings suggest that the activity of enzyme is highly dependent on the core domain. Changes in charge, amino acid tail and conformation lead to decreased enzyme activity. Also tetrameric structure is calcium related. It seems that changes of amino acid sequence convert enzyme stability.