كلونينگ و توالي يابي ژن كامل راپتري دو (ROP2) از توكسوپلاسماگوندي

Cloning and sequence analysis of the complete Rhoptry protein2 (ROP2) gene of Toxoplasma gondii

مقدمه: توكسو پلاسما گوندي يك تك ياخته داخل سلولي مي‌باشد كه باعث بيماري توكسو پلاسموزيس در انسان و حيوانات مي‌شود. بيماراني كه نقص سيستم ايمني دارند، عفونت مزمن اين بيماري مي‌تواند دوباره فعال شده و باعث آنسفاليت شود كه اغلب كشنده مي‌باشد. پروتيين راپتري 2 توكسو پلاسما گوندي(ROP2) يكي از ميانجي هاي مهم در آميزش ارگانل-PVM مي باشد. پروتيين ROP2 در بدن انسان توسط كلون Tcell شناسايي مي‌شود . همچنين ROP2 براي Bcell داراي اپي توپ مي‌باشد. همه اين ويژگي هاي ROP2 باعث شده كه از اين پروتيين به عنوان كانديد براي تهيه واكسن هاي نوتركيبي و كوكتلي عليه توكسوپلاسموزيس استفاده شود. بحث و نتيجه گيري: نتايج اين تحقيق نشان داد كه با موفقيت ژن كامل ROP2 در داخل پلاسميد pTZ57R/T كلون شده است و از اين پلاسميد نوتركيب (pT-ROP2) مي توان براي ساختن DNA واكسن بر عليه توكسوپلاسموزيس استفاده كرد. يافته ها: اين پژوهش نشان داد كه ژن كامل ROP2 در داخل پلاسميد pTZ57R/T كلون شده و پلاسميد نوتركيب (pT-ROP2)را تشكيل مي دهد. توالي يابي ژن كامل ROP2 كه در داخل وكتور pTZ57R/T كلون شده است، نشان دادكه توالي ژن كامل ROP2 از سوش بسيار بيماريزاي توكسوپلاسما گوندي (معروف به سوش RH)شباهت زياد 98 درصدي با سوش RH موجود در بانك ژني دارد. (Gen bank Accession No.Z36906.1). مواد و روش ها: در اين مقاله كلونينگ و توالي يابي ژن كد كننده پروتيين كامل ROP2 از توكسوپلاسما گوندي توصيف خواهد شد. در اين تحقيق ، ابتدا DNA ژنومي توكسوپلاسما گوندي استخراج شده و از آن براي تكثير ژن كامل ROP2 با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي طراحي شده استفاده گرديد.سپس محصول PCR در داخل وكتور pTZ57R/T كلون شده و متعاقبا پلاسميد كلون شده در باكتري E.Coli ترانس فورم شده و به دنبال آن پلاسميد حاوي ژن كامل ROP2(pT-ROP2)كه توسط هضم آنزيمي و PCR تاييد شده بود، از باكتريهاي ترانس فورم شده، استخراج گرديد و از آن براي توالي يابي ژن كامل ROP2 استفاده گرديد.

Background:Toxoplasma gondii is the intracellular protozoan parasite responsible for animal and human Toxoplasmosis. In immunodeficient patients, chronic infection with Toxoplasma gondii can reactivate and produce encephalitis, which is often lethal. ROP2 (Rhoptry Protein of Toxoplasma gondii) is one of the most important interferer in organelle and PVM blending. ROP2 protein is recognized by clone Tcell (Tcc32) in human body and has also epitop for Bcell. All of these characteristics of ROP2 is caused to use as a candidate to make cocktail vaccine and recombinant vaccine against Toxoplasmosis. Materials and Methods:This paper describes the cloning and sequence analysis of the gene which encodes the complete Rhoptry Protein 2(ROP2) gene of Toxoplasma gondii. In the present work, first, genomic DNA of Toxoplasma gondii was extracted and used for amplifying of ROP2 gene as a template. Then PCR product was cloned into pTZ57R/T Vector and plasmid containing ROP2 gene (pT-ROP2) was extracted from transformed bacteria and ROP2 gene cloned into pTZ57R/T was sequenced. Results: This research showed that the ROP2 gene contains no intron and can extract it from genomic DNA of Toxoplasma gondii. Results showed also that ROP2 gene is cloned in pTZ57R/T plasmid, forming pT-ROP2 recombinant plasmid. Sequence analysis of ROP2 gene cloned into pTZ57R/T vector showed that ROP2 gene sequence from a high virulent strain of Toxoplasma gondii (known as RH strain) has high homology of 98% with RH strain (GenBank Accession No. Z36906.1). Conclusion: The results showed that ROP2 gene has been successfully cloned in pTZ57R/T plasmid and from this recombinant plasmid , vaccine DNA can be produced against Toxoplasmosis