غني سازي كتابخانه ژني نانوبادي عليه پروتيين سطحي ويروس پاپيلوماي انساني عامل سرطان دهانه رحم

Enrichment of nanobody gene library against human papillomavirus as the main cause of cervical cancer

مقدمه و هدف: ويروس پاپيلوماي انساني، عامل اصلي سرطان دهانه رحم است و به راحتي از فردي به فرد ديگر منتقل مي شود. براي جلوگيري از انتشار اين ويروس، نياز به تشخيص زود هنگام و حساس سرطان دهانه رحم به خوبي احساس مي شود. هدف از اين مطالعه، غني-سازي كتابخانه فاژي به منظور جداسازي نانوبادي هاي اختصاصي عليه پروتيين 1L ويروس پاپيلوماي انساني است. از اين نانوبادي ها مي توان در كيت هاي تشخيصي با حساسيت بالا براي سرطان دهانه رحم استفاده كرد. مواد و روش ها: تكثير فاژهاي حاوي كتابخانه نانوبادي در باكتري Escherichia coli انجام-شد و غني سازي كتابخانه به كمك روش نمايان سازي فاژي صورت گرفت. به منظور اطمينان از غني سازي، تعداد فاژهاي حاصل از هر مرحله شمرده شد و محصولات حاصل از هر مرحله غني سازي به كمك روش پلي كلونال فاژ الايزا مورد بررسي قرار گرفتند؛ سپس بهترين كلون ها از طريق روش مونوكلونال فاژ الايزا جداسازي شدند و با كمك تعيين توالي ژني صحت آنها تاييد شد. يافته ها: صحت فرايند غني سازي از طريق افزايش تعداد كلون ها در خروجي غني سازي و افزايش اختلاف جذب نوري با كمك روش فاژ الايزا، در طول موج 450 نانومتر به اثبات رسيد و در انتها، 4 كلون به عنوان بهترين كلون ها انتخاب شدند. نتيجه گيري: پس از سه مرحله غني سازي، كتابخانه فاژميدي عليه پروتيين 1L چهار سويه ويروس پاپيلوماي انساني غني سازي شد.

Background and Objective: The human papillomavirus (HPV) is the main cause of cervical cancer. The symptoms of the disease are non-specific and it can be transferred from one person to another one. In order to prevent the spread of HPV virus and reducing mortality rate of cervical cancer, early detection programs are needed. Accurate and highly sensitive test is essential for screening examination. So, in this study, our aim was enrichment of nanobody library against HPVs L1 proteins to isolate clones which produce specific nanobody against L1 proteins. In the future, these nanobodies can be used in highly sensitive diagnostic kits for early detection of cervical cancer. Materials and Methods: The phagmids of polyclonal library were amplified in Escherichia coli strain TG1. Panning of library and selection of clones were carried out against HPV L1 protein. The titer of output phagmids and optical density in Phage-ELISA were evaluated. The best clones were isolated by monoclonal phage ELISA method and checked by sequencing and colony PCR. Results: An increase in the number of output clones in consecutive rounds of panning and the rise in the difference of OD450 in phage ELISA shows the accuracy of the enrichment process. At last, 4 clones were isolated as best ones. Conclusion: This study proved that after three rounds of panning, the phagmid library was enriched for anti HPVs L1 nanobodies and isolation of specific clones against this antigen were accomplished. By use of these anti HPV L1 nanobodies in laboratory kits, new hopes for early diagnosis of precancerous lesions with high reliability can be achieved.