عنوان مقاله :
كلونينگ و بيان آسپاراژيناز در باكتريcoli Escherichia
پديد آورندگان :
قانع، مريم نويسنده استاديار ميكروبيولوژي، دانشگاه آزاد اسلامي، واحد اسلامشهر ghane, Maryam , بمبيي، بيژن نويسنده استاديار بيولوژي مولكولي، پژوهشگاه ملي مهندسي ژنتيك و زيست فناوري، گروه صنايع تخميري، كرج، ايران bambaei, Bijan , تابنده، فاطمه نويسنده tabandeh, fatemeh , قانع، مژگان نويسنده گروه شيمي-دانشگاه آزاد اسلامي واحد اسلام شهر Ghane, M
اطلاعات موجودي :
فصلنامه سال 1389 شماره 0
كليدواژه :
آسپاراژيناز II , بيان , فعاليت آنزيمي , E. coli , ansB
چكيده فارسي :
آنزيم L-آسپاراژيناز هيدروليز اسيد آمينه L-آسپاراژين به L-اسيد آسپارتات و آمونيوم را كاتاليز مي كند. آنزيم هاي با فعاليت آسپاراژينازي، نقش مهمي در متابوليسم كليه موجودات به عهده دارند و در داروسازي نيز حايز اهميت هستند. آنزيم آسپاراژيناز II، يكي از داروهاي شناخته شده در درمان لوكمياي لنفوبلاستيك حاد است. در اين تحقيق به منظور دستيابي به مقادير بالاي آنزيم، ژن آسپاراژيناز II (ansB) با تكنيك PCR و با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي طراحي شده از باكتريDH5? E. coli جدا شد. قطعه موردنظر كه اندازه اي حدود bp1047 داشت، با دو آنزيم I NdeI / Sac بريده شد و در جايگاه مشابه در پلاسميد pET21a در پايين دست پروموتر T7 كلون شد. پلاسميد نوتركيب، وارد باكتري DH5 ? E. coli گرديد. پس از تاييد كلونينگ با استفاده از PCR و برش آنزيمي، پلاسميد نوتركيب، وارد باكتريBL 21 E. coli گرديد و پس از القا با IPTG با غلظت 1 ميلي مولار، بيان ژن با استفاده از SDS-PAGE و سنجش فعاليت آنزيمي تاييد شد. حضور باند حدوداً 35 كيلودالتوني در SDS-PAGE بيان ژن را اثبات نمود. براي سنجش فعاليت، از روش سنجش ميزان آمونياك توليد شده، استفاده شد. روش سنجش فعاليت آنزيمي ميزانUnit/ml 86 آنزيم را نشان داد. پروموتر قوي T7 منجر به توليد مقادير بالايي از آنزيم گرديد؛ به طوري كه فعاليت آن بيش از 20 برابر فعاليت آن در سويه وحشي بود. به علاوه، ميزان بالاي پروتيين توليد شده در محلول رويي نشانگر توليد خارج سلولي پروتيين فوق است كه خالص سازي آن را آسان تر خواهد كرد.
عنوان نشريه :
دانش زيستي ايران
عنوان نشريه :
دانش زيستي ايران
اطلاعات موجودي :
فصلنامه با شماره پیاپی 0 سال 1389
كلمات كليدي :
#تست#آزمون###امتحان
