بيماري لكه برگي باكتريايي ختمي خواب آلود ناشي از جدايه هاي لوان مثبت Pseudomonas viridiflava

BACTERIAL LEAF SPOT OF Malvaviscus penduliflorus INCITED BY LEVAN-POSITIVE STRAINS OF Pseudomonas viridiflava

درسال 1388 يك بيماري لكه برگي روي درختچه هاي ختمي (Malvaviscus penduliflorus) در شهرستان ساري ديده شد. لكه ها زاويه اي يا نامنظم سياه رنگ و نكروزه به قطر دو تا چهار ميلي متر و داراي هاله روشن بودند. با كشت نمونه هاي آلوده روي محيط آگار غذايي حاوي سوكروز يك باكتري كرم رنگ، گرم منفي، اكسيداز منفي و لوان مثبت جداسازي شد. جدايه ها در محيط King’s B توليد رنگدانه سبز فلورسنت كرده و سبب لهانيدن ورقه هاي سيب زميني شدند جدايه ها روي گياهان ختمي، نارنج و پرتغال بيماري‌زا بودند. نقوش الكتروفورزي پروتيين هاي سلولي جدايه ها به جدايه عامل بلاست مركبات در شمال ايران و جدايه استاندارد Pseudomonas viridiflava شبيه بود. با توالي يابي ژن 16S rRNA چند جدايه ( توسط شركت Millegen ، فرانسه) و مقايسه توالي ها در GenBank، توالي ژن 16S rRNA جدايه هاي عامل لكه برگي ختمي 99درصد به چند جدايه Pseudomonas viridiflavaشبيه بود. در الگوي انگشت‌نگاري DNA حاصل از روش rep-PCR با استفاده از آغازگرهاي REP-PCR, BOX-PCR وERIC-PCR ، جدايه ها 45درصد و با روش IS50-PCR ، 46 درصد با گونه P.viridiflava مشابهت داشتند. براساس مجموع ويژگي هاي فتوتيپي، بيماري‌زايي و ژنوتيپي مي توان باكتري عامل لكه برگي ختمي خواب آلود را به عنوان جدايه هاي لوان مثبتPseudomonas viridiflava معرفي نمود.

Sleeping hibiscus (Malvaviscus penduliflorus) plants showing leaf spot symptoms have been observed since 2008 in Sari. The spots were 2-4 mm in diameter, necrotic angular to irregular brown to black, and surrounded by chlorotic halos. A levan positive, Gram and oxidase negative bacterium was isolated from the symptomatic leaves on sucrose nutrient agar (NAS). The bacterium produced fluorescent pigment on medium B of King and rotted potato tuber slices. Pathogenicity of selected strains was confirmed by inoculation of sleeping hibiscus, sweet orange and seville orange with bacterial suspension of strains. In electrophoretic profile of cell proteins the strains were, partially similar to the strains of Pseudomonas viridiflava. 16S rRNA gene of strains were sequenced at Millegen company(France) using standard primers , nucleotide sequence analysis in GenBank showed that the nucleotide sequence of 16s rRNA gene of sleeping hibiscus strains had 99% similarity to few reference strains of Pseudomonas viridiflava. In ERIC-BOX and REP- PCR, the fingerprints of the strains from sleeping hibiscus showed 45% and in Is50- PCR 46% similarity to the reference strain of Pseudomonas viridiflava. Based on phenotypic, pathogenicity and genomic properties, the causal agent of leaf spot of sleeping hibiscus (Malvaviscus penduliflorus) were identified as levan positive strains of Pseudomonas viridiflava