Rhizobium radiobacter به عنوان عامل سرطان طوقه و ساقه فيكوس بنجامين در مازندران

Rhizobium radiobacter AS THE INCITANT OF STEM AND CROWN GALL ON Fcus benjamina IN MAZANDARAN PROVINCE

فيكوس بنجامين (Weeping Fig , Benjaminʹs Fig) با نام علمي Ficus benjamina يكي از گياهان خانواده Moraceae است اين گياه بومي مناطق جنوب آسيا واستراليا بوده و ارتفاع آن گاهي تا حدود 15 متر مي‌رسد. در استان مازندران اين گياه به صورت زينتي در گلدان و باغچه كاشته مي‌شود. در بازديدهاي انجام شده از گلخانه‌هاي پروش گل‌هاي زينتي در استان مازندران، از نهال‌هاي فيكوس داراي علايم گال طوقه و ساقه نمونه‌برداري و نمونه‌ها به آزمايشگاه منتقل شد. گال‌ها پس از ضدعفوني با هيپوكلريت سديم يك درصد و شستشو با آب مقطر استريل داخل تشتك‌هاي سترون حاوي مقداري آب مقطر استريل خرد گرديده و پس از گذشت 30 دقيقه، چند قطره از سوسپانسيون حاصل روي محيط سيب زميني- دكستروز- آگار(Potato dextrose agar, PDA) كشت گرديد. پس از رشد باكتري‌ها در دماي 28 درجه سلسيوس، پرگنه‌هاي شبيه به Agrobacterium (پرگنه‌هاي سفيد رنگ، محدب با حاشيه صاف) انتخاب گرديد. بيماري‌زايي جدايه‌ها با مايه‌زني آنها روي ساقه گوجه فرنگي و تشكيل گال پس از سه هفته اثبات شد. جدايه‌ها قادر به توليد كتولاكتوز بودند و از آرابينوز،‌ سوربوز،‌ ملزيتوز، دولسيتول،‌ فروكتوز، سوربيتول،‌ سلوبيوز،‌ زايلوز،‌ رافينوز،‌‌ زايليتول، لاكتوز، استات، لاكتات،‌ دي تارتارات و پروپيونات به عنوان منبع كربن استفاده كرده و لي قادر به مصرف اريتريتول،‌ تايروزين،‌ ال- تارتارات ، مالونات و سيترات نبودند. چنين خصوصياتي نشان دهنده تعلق جدايه‌ها به گونه Rhizobium radiobacter (Agrobacterium radiobacter? A.tumefaciens) است. ژنvirD2 نمونه ها با استفاده از جفت آغازگرVirD2A/VirD2C تكثير گرديد. تمامي جدايه هاي به كار رفته قادر به تكثير باند p 224 با اين آغازگر شدند. در الگوي انگشت نگاري DNA با استفاده از آغازگر BOX ، جدايه ها 60 درصد و درIS50-PCR? 75درصد به جدايه استاندارد Rhizobium radiobacter ICMP (Intern. Collection of Microorganisms from Plants, Auckland, New Zeeland) 8586 شباهت داشت، در حالي‌كه الگوي انگشت نگاري DNA جدايه استاندارد ICMP 14256 R.larrymoorei فقط در دو يا سه باند، مشابه جدايه‌‌هاي فيكوس بنجامين بود و در دندوگرام ترسيم شده درگروه جداگانه‌اي قرار گرفت. بر اساس مجموع ويژگي‌هاي مورفولوژيكي، فيزيولوژيكي، بيوشيميايي، بيماريزايي و آزمون PCR ، جدايه‌هاي عامل گال طوقه و ساقه فيكوس به عنوانR.radiobacter (Agrobacterium tumefaciens) تشخيص داده شدند. در گزارش ديگري گونه R.larrymoorei به عنوان عامل گال ساقه در فيكوس بنجامين در مازندران معرفي شده است (Ghasemi, et al.2006. Iram. J. Plant Path. Vol. 42. P 197) بنابراين اين احتمال مي‌رود كه سرطان ساقه و تنه فيكوس بنجامين در اين استان توسط دو گونه مختلف اگروباكتريوم ايجاد شود.

Ficus benjamina commonly known as the Weeping Fig or Benjaminʹs Fig, is a species of Moraceae, native to south and southeast Asia and Australia. It is a topiary tree reaching 15 metres in height in natural conditions. Ficus benjamina is planted as a potted plant and as an ornamental shrub in gardens in Mazandaran and elsewhere in the country. Stem and crown gall symptoms were observed on Ficus benjamina in the greenhouses in Mazandaran. The affected tissues were transferred to the laboratory and the galls were washed in running water and surface sterilized for a few minutes in 1% sodium hypochlorite solution. The galls were rinsed with several changes of sterile distilled water (SDW), crushed in SDW and were left for 30 minutes at room temperature. A few drops of the suspension were streaked onto plates of PDA (Potato dextrose agar). The plates were incubated at 28°C. Colonies similar to Agrobacterium (white, mucoid and convex colonies) were selected. The strains were inoculated on the stems of tomato and the strains that produced galls three weeks after inoculation were selected. The strains produced ketolactose from lactose, Arabinose, sorbose, melezitose, dulcitol, fructose, sorbitol, cellobiose, xylose, raffinose, xylitol, lactose, acetate, lactate, D-tartrate and propionate were used by all strains whereas erythritol, valine, tyrosine, L-tartrate, malonate and citrate were used by none of them tested. All strains amplified a 224 bp fragment of the VirD2 gene in PCR reactions using VirD2A/VirD2C primers. In BOX-PCR, the fingerprints of the strains from Ficus benjamina showed 60% and in Is50- PCR 75% similarity to the reference strain of Agrobacterium radiobacter ICMP (Intern. Collection of Microorg. from plants) 8586. Based on morphological, physiological and biochemical properties and the results of the PCR tests, the strains were identified as Rhizobium radiobacter. In a previous report, Rhizobium larrymoorei was identified as the incitant of stem and crown gall on Ficus benjamina in Mazandaran province (Ghasemi, et al.2006. Iran. J. Plant Path. Vol. 42. P 197), therefore, confirmation of the presence of this species needs further investigation.