يك روش ساده، سريع و مقرون بصرفه براي تخليص تريپسين از پانكراس گوساله

A simple, fast and commercial method for trypsin purification from bovine pancreas

ترپسين از جمله آنزيم هايي است كه در فرآيندهاي بيوتكنولوژي كاربرد فراوان دارد. در آزمايشگاه كشت سلولي، طي فرآيند پاشاژ سلول ها، تريپسين جهت جدا كردن سلول هاي چسبيده شده به ديواره ظرف كشت سلولي استفاده مي شود. همچنين جهت جدا كردن سلول ها از يك بافت مي توان از تريپسين استفاده كرد. تريپسين در فرايند توليد پپتن و پروتيين هيدروليز شده از كازيين شير و سويا بطور انبوه و گسترده مورد استفاده قرار مي شگيرد(21،1). تريپسين يك سرين پروتياز است كه در سيستم گوارش اكثر مهره داران يافت مي شود ترپسين از جمله آنزيم هايي است كه در فرآيندهاي بيوتكنولوژي كاربرد فراوان دارد. در اين مطالعه با استفاده از روش هاي رسوب دهي پروتيين ها با سولفات آمونيوم اشباع شده 35 درصد و 75 درصد، رسوب دهي با تري كلرو استيك اسيد 5/2 درصد وزني حجمي، رسوب دهي پروتيين ها در 5/6=pH و در نهايت با كروماتوگرافي تمايلي تريپسين موجود در پانكراس تخليص شد. با اين روش، از هر كيلو گرم پانكراس گوساله 8/2 گرم تريپسين خالص با فعاليت ويژه (U/mg) 155 استحصال گرديد. نتايج اين مطالعه نشان ميدهد كه با اين روش مي توان 26 درصد از آنزيم موجود در پانكراس را بدست آورد. در نهايت مي توان گفت اين روش يك روش ساده، سريع و مقرون به صرفه جهت توليد انبوه تريپسين باشد.

Trypsin is a serine protease found in the digestive system of many vertebrates, where it hydrolyses proteins. Trypsin has been used widely in various biotechnological processes. In this study trypsin was purified using two precipitation cut, 35% and 75% as saturation percent of Ammonium sulfate solutions, TCA precipitation (2.5% W/V), pH precipitation and finally affinity chromatography. This method could be used to obtain 2.8 g purified trypsin with specific activity 155 U/mg and 26% recovery from 1kg bovine pancreas. Therefore, this method is a simple, fast and commercial method for scale-up of trypsin extraction from bovine pancreas.