اثر گونه هاي تريكودرما بر رهاسازي زيوسپور Phytophthora sojae ، شدت بيماري در سويا و سنجش فعاليت آنزيم هاي گلوكاناز

EFECT OF Trichoderma SPECIES ON ZOOSPORE PRODUCTION OF Phytophthora sojae, DISEASE SEVERITY, AND GLUCANASE ENZYMES ACTIVITY ASSAY

در اين بررسي اثر ترشحات مايع خارج سلولي 12 گونه قارچ تريكودرما شامل Trichoderma ceramicum , T. virens, T. pseudokoningii , T.koningii, T. koningiosis, T. atroviridae, T. viridescens, T. asperellum, T. harzianum, T .orientalis. , T. brevicompactum و T. spirale بر توليد زيوسپور Phytophthora sojae و ميزان فعاليت آنزيمهاي بتا 1 و 3 گلوكاناز و بتا 1 و 4 گلوگاناز (سلولاز) اين گونهها در ارتباط با تجزيه ديواره سلولي فيتوفتورا در شرايط آزمايشگاه آزمايش شده و در نهايت اثر اين گونه ها بر كنترل بيماري پوسيدگي ريشه و طوقه سويا در گلخانه بررسي شد. جهت بررسي اثر تركيبات فيلتر شده گونههاي فوق الذكر بر بازداري از توليد زيوسپور Phytophthora sojae غلظتهاي 5/0، 1، 5 و 10 اين تركيبات در آب مقطر ديونيزه سترون تهيه شد. ميزان فعاليت آنزيمهاي بتا 1 و 3 گلوكاناز و بتا 1 و 4 گلوكاناز جدايههاي اخيرالذكر در حضور گلسيرين و هيف فيتوفتورا به عنوان منبع كربن، در محيط كشت ويندينگ، ارزيابي شدند. نتايح نشان داد كه تركيبات فيلتر شده خارج سلولي تمامي گونهها سبب كاهش توليد زيوسپور شدند، غلظتهاي مختلف اثر بازدارندگي متفاوتي داشته و بيشترين بازدارندگي مربوط به T. virens و T. brevicampactom بود. در بررسي اثر دو منبع كربن در توليد آنزيمهاي هيدروليتيك توسط تريكودرما، نتايح نشان داد كه كاربرد هيف فيتوفتورا در مقايسه با گلسيرين به عنوان منبع كربن در محيط رشد گونههاي تريكودرما سبب افزايش فعاليت آنزيمهاي بتا 1 و 3 گلوكاناز و بتا 1 و 4 گلوكاناز در تمامي گونهها شد و بيشترين ميزان فعاليت هر دو آنزيم مربوط بهT. brevicampactom و T. virens بود كه ميزان فعاليت آنزيم بتا 1 و 3 گلوكاناز به ترتيب معادل U/mg protein 31/2 و 73/1 مربوط به تيمار گليسرين، U/mg protein 47/4 و 91/3 مربوط به تيمار هيف . sojae P بود و ميزان فعاليت آنزيم بتا 1 و 4 گلوكاناز مربوط به اين دو گونه به ترتيب U/mg protein66/0 و 86/0در تيمار حاوي گليسرين و U/mg protein 72/1 و 72/1 در تيمار حاوي ميسليوم فيتوفتورا در محيط كشت بود. جهت بررسي اثر گونههاي تريكودرما بر شدت بيماري پوسيدگي فيتوفتورايي طوقه و ريشه سويا در شرايط گلخانه در خاك سترون و در مرحله سه برگي (v1) در قالب دو طرح كاملاً تصادفي با 15 تيمار شامل شاهد سالم، شاهد آلوده، هر كدام از گونه?هاي تريكودرما به علاوه عامل بيماري و سبوس گندم به علاوه عامل بيماري در سه تكرار انجام گرفت. در اين بررسي موفقترين گونهها در كنترل بيماري، كاهش شدت بيماري و كاهش درصد مرگ گياهچه در گلخانه T. orientalis ،T. brevicompactum و T. spirale بودند.

In this present study the antagonistic effect of culture filtrate metabolites of twelve Trichoderma species including: Trichoderma ceramicum, T. virens, T. pseudokoningii, T. koningii, T. koningiosis, T. atroviridae, T. viridescens, T. asperellum, T. harzianum, T. orientalis., T. brevicompactum and T. spirale was studied on Phytophthora sojae zoospore production and activity rate of B-1, 3-glucanase and B-1, 4-glucanase enzymes of all species in relation to degradation of Phytophthora cell wall used in laboratory condition. In final tests, the biocontrol effect of Trichoderma species on Phytophthora root rot of soybean in greenhouse, was also studied. To analyze the effects of culture filtrates on the zoospore production at concentrations of 0.5, 1, 5, and 10 percent the culture were used in sterile deionized distilld water. To compare the effect of two types of carbon source on production of hydrolytic enzymes by Trichoderma, activity rate of B-1, 3-glucanase and B-1, 4-glucanase enzymes of all species were evaluated in presence of glycerol and P. sojae - hyphe as the carbon source in Wiendling’s medium. The results showed that culture filtrates of all species inhibited of zoospore production. Different concentration had different inhibition effects. The most inhibition effects was obtained from T. virens and T. brevicampactom culture filtrates. The results of enzyme assays showed that using Phytophthora - hyphe in medium increased the B-1, 3-glucanase and B-1, 4-glucanase enzyme activities compared with glycerol in all Trichoderma species. The highest activity rates for both enzyme obtained from T. brevicompactum and T. virens which for B-1, 3-glucanase in glycerol treatment were 2.31 and 1.73 U/mg protein and in P. sojae hyphe treatment were 4.47 and 3.91 U/mg protein. The activity rate of B-1,4-glucanase was 0.66 and 0.86 U/mg protein in glycerol treatment and 1.72 and 1.72 U/mg protein in P. sojae hyphe treatment. To study the biocontrol effect of Trichoderma species on the soybean root rot severity, a completely randomized design was used with 15 treatments including each Trichoderma species cultured on wheat bran plus disease agent in sterile soil, at the trifoliolate stage (v1) of soybean (Wiliams cultivar), health control and disease control in the same kind soil, with three replicates at greenhouse condition. T. orientalis ، T.brevicompactum and T. spirale showed the most effects on the disease severity reduction, damping of reduction and the growing factor promotion.