تشخيص عفونت ويروسي لوسمي گاو با استفاده از روش Nested-PCR

Detection of bovine leukemia virus infection by Nested-PCR analysis

ويروس لكوز گاو ( BLV ) رترو ويروسي است كه موجب لكوز يا لمفوماي مزمن گاو در بسياري از كشورهاي جهان مي‌شود. اليزا اولين روش تشخيصي براي غربالگري حضور پادتن ها بر عليه ويروس لكوز گاوي است. تا كنون روشن نشده است كه آيا اين روش پادتن ها را در زمان آلودگي به ويروس لوسمي گاو شناسايي مي‌كند يا خير. واكنش زنجيره اي پلي مراز (PCR) براي توالي‌هاي اختصاصي DNA پروويروس هدف، در سلول هاي تك هسته اي خون محيطي (PBML) استفاده شده است. به منظور يافتن روشي حساس و كارا براي تشخيص آلودگي به ويروس BLV در نمونه‌هاي خون و بافت‌ها يا محتواهاي مختلف، روش آشيانه‌اي واكنش زنجيره اي پلي مراز (Nested-PCR) بر اساس شناسايي ژن BLV-gag طراحي گرديد. آزمون آشيانه اي PCR بر روي نمونه‌هاي اخذ شده از گاوهايي كه به صورت طبيعي آلوده شده‌اند (281 نمونه)، نمونه‌هاي بافتي پارافيني(3 نمونه) و DNAي تخريب شده (10 نمونه عقده لمفاوي سونيكه) انجام شد. حساسيت و ويژگي آزمون PCR به ترتيب 85/0 و 84/0محاسبه گرديد. درجه توافق بين دو آزمون (كاپا) مقدار 693/0 محاسبه گرديد كه قابل توجه است. ارزش پيشگويي مثبت آزمون (دقت) 82/0 و ارزش پيشگويي منفي آن 86/0 بود . در نهايت صحت آزمون 85/0 محاسبه شد. اين مطالعه نشان داد كه روش واكنش زنجيره اي پلي مراز آشيانه‌اي در مقايسه با روش هاي PCR معمولي استفاده شده در آزمايش هاي متفاوت از حساسيت بيشتري برخوردار است. اين تكنيك براي غربالگري انبوه و همچنين تشخيص DNA پروويروس در نمونه هاي بافتي خاص اعم از پارافينه يا نمونه هاي قديمي مفيد خواهد بود.

Bovine leukemia virus (BLV) is a retrovirus causing a chronic leukemia/lymphoma in cattle in many countries around the world. Screening for antibodies by Elisa has been the primary means of detecting the presence of this virus. It is not yet known if this assay will detect antibodies in all cattle during a concomitant bovine leukemia virus infection. The polymerase chain reaction (PCR) of the target proviral DNA in peripheral blood mononuclear cells (PBML). In order to find a highly sensitive and efficient method for the diagnosis of BLV infection in different matrices as well as blood samples, we have designed a Nested-PCR method to detect BLV-gag proviral DNA in naturally infected cattle together with paraffin embedded blocks and degraded DNAs. Samples of natural infected cows (n=281), paraffin embedded (n=3) and degraded DNA (n=10) were examined. When using ELISA as a reference test, sensitivity and specificity for nested PCR were 0.85 and 0.84, respectively. Interpretation of kappa scores for two methods was substantial (0.693). Predictive value of a positive test was 0.82, and predictive value of a negative test was 0.86. The percentage of cows correctly classified by nested PCR assay was 85%. This strategy have shown to allow detection at different experiments and had higher sensitivity in comparison with normal PCR. This latter technique is useful for mass screening and could be useful to detect proviral DNA in paraffin embedded or old samples.