بررسي مولكولي آللهاي DQB1،HLA-DRB1 در مبتلايان به كيست هيداتيك

HLA –DRB1*, DQB1* Alleles In Hydatid Patients By Molecular Typing

مقدمه: هيداتيدوز يكي از بيماريهاي انگلي مهم است كه با استقرار مرحله لاروي كرم اكينوكوكوس گرانولوزوس سگ در ميزبانان علفخوار واسط مثل گوسفندوگاوو...و هم چنين انسان، ايجاد مي شود. تفاوت در حساسيت و مقاومت به ابتلا و عود در بيماريهاي عفوني ازجمله كيست هيداتيك و آلويولار در حيوانات وانسان ديده شده است كه به دليل تفاوت درفاكتورهاي فردي و پاسخهاي ايمني، مبتني بر تفاوت در ژنهاي كد كننده آنتي ژنهاي لوكوسيت هاي انسان و يا حيوان، مي باشد. هدف از اين تحقيق كه براي اولين بار در ايران بر روي بيماران هيداتيد انجام مي شود، بررسي آللهاي DRB1 و DRB1 لوكوسيت انسان در منطقه است كه در ايجاد مقاومت يا حساسيت به آلودگي كيست هيداتيك نقش دارند. بحث و نتيجه گيري: اين مطالعه اختلاف زمينه هاي ژنتيكي افراد در ابتلا به كيست هيداتيك را در منطقه مورد بررسي نشان داد و مشخص كرد كه آلل DQB1*03 در ايجاد مقاومت بيشتر در برابر استقرار و رشد كيست هيداتيك تك حفره اي نقش دارد. مطالعات تكميلي با روشهاي مولكولي با قدرت تفكيك بالاتر پيشنهاد مي گردد. يافته ها: نتايج نشان داد كه از بين ژنهاي بررسي شده DQB1، DRB1دربيماران و افراد سالم فراواني آلل DQB1*03 با اختلاف معني داري در گروه غير هيداتيدي بالاتر است(P < 0.02) و(87/2Odds ratio = ).ومصونيت اين افراد در صورت مواجهه با عامل بيماري در مقايسه با افراد فاقد اين آلل حدود 87/2 برابر مي باشد ودارندگان اين آلل مقاومت بيشتري در برابر استقرار و رشد كيست هيداتيك تك حفره اي دارند. مواد و روشها: براي شناسايي آللهاي DQB1(23 واكنش)، DRB1(8 واكنش) با استفاده از ژنوم انساني، 56 بيمارايراني مبتلا به كيست هيداتيك تشخيص داده شده و يا جراحي شده و 30 فرد سالم با روش PCR-SSP (Polymerase Chain Reaction - Sequence Specific Primer) آزمايش شدند.DNA نمونه ها از خون كامل تخليص گرديد و PCR با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي انجام شد. پس از الكتروفورز محصول روي ژل آگارز نتايج با دستگاه UV خوانده وآللهاي شناسايي شده, ثبت شد. آناليز نتايج مولكولي ابتدا بااستفاده از نرم افزارINNO TRAIN و جداول فراواني و تفسير آللها براي تعيين تركيب آللي(Allele Combination) انجام و پس از آن آزمون همگني با استفاده از2? و تست دقيق فيشرانجام شد. براي نمونه هاي معني دار تحليل رگرسيون لجستيك انجام و Odds - ratio آنها محاسبه گرديد.

Background: Hydatidosis is a important disease that results from infection with larvae of the dog tape worm , Echinococcus granulosus in human and farm animals .Resistance or susceptibility to infectious diseases , for example , cystic and alveolar echinococcosis is restricted by individual host factors and immunologic responses,in many surveys has been shown.The target of this study that is the first survey dealing with the correlation between HLA-DRB1*& DQB1* alleles and cystic echinococcosis in Iranian patient,is investigation HLA-DRB1*and DQB1* allelic polymorphism in Iranian patient with hydatidosis . Materials and methods: The study was carried out on 56 patients with confirmed cystic echinococcosis and 30 apparently healthy individuals living on Arak area by HLA-DRB1*& DQB1* typing with PCR-SSP method.The first step was founding patients and blood sampling .DNA was prepared from whole blood and we used PCR-SSP with 31 primer mixes for per sample . PCR reaction mixtures were loaded in agarose gels and after electrophoresis , geles were examine under UV illumination and gel document . Analyse of results carried out with specific software and frequency& interpretation tables and homogeneity test for calculation of P-value in ?2 test with fisher?s exact test . significant samples with logistic regression analysed and Odds-ratio calculate . Results: A statistically significant positive association was found between HLA-DQB1*02 and the occurrence of cystic echinococcosis(P < 0.05),(Odds-ratio=2.87) Conclusion: The most useful markers of HLA exists for the study of the relationship between genetical background and cystic echinococcosis with molecular high resolution methods.