ارزيابي دو روش TRAP و FRAP جهت تعيين پتانسيل آنتي اكسيداني تام سرم موش صحرايي

Evaluation of TRAP and FRAP Methods for Assessing Total Antioxidant Capacity of Rat Serum

مقدمه : با توجه به اينكه مواد آنتي اكسيدان موجود در سرم يا پلاسما متعدد بوده و همچنين ميانكنش هاي بين هر آنتي اكسيدان و شناساگر مربوطه متفاوت مي باشد، لذا روشهاي مختلفي براي تعيين پتانسيل آنتي اكسيداني تام، بوجود آمده است. در اين تحقيق، دو روش TRAP و FRAP جهت اندازه گيري پتانسيل آنتي اكسيداني تام سرم موش، مورد ارزيابي و مقايسه قرار گرفت. بحث و نتيجه گيري: پتانسيل آنتي اكسيداني يك ماده آنتي اكسيدان برعليه راديكالهاي آزاد، ضرورتا با توانايي آن ماده در احيا آهن فريك به آهن فروس برابر نمي باشد. يافته‌ها: نتايج اين بررسي نشان داد كه زمان نمونه گيري تاثيري بر ميزان پتانسيل آنتي اكسيداني تام سرم موش ها ندارد. همچنين مقايسه نتايج بدست آمده از دو روش TRAP و FRAP نشان داد كه مقدار پتانسيل آنتي اكسيداني تام بدست آمده از روش TRAP تقريبا 3 مرتبه از روش FRAPبالاتر است. بيشترين درصد پتانسيل آنتي اكسيداني تام سرم بدست آمده از روشTRAP مربوط به آلبومين (33/30%) و در روش FRAP مربوط به آنتي اكسيدان اسيد اوريك (13/57%) بود. علاوه بر اين، ميزان سهم آنتي اكسيدان B-كاروتن در روش TRAP برابر با 22/7% درحاليكه در روش FRAP برابر با صفر درصد بود. مواد و روش‌ها: جهت تهيه نمونه خون، تعداد 10 موش صحرايي (جنس نر، نژاد ويستار) با ميانگين وزني 5 ± 190 گرم و سن 8 هفته به طور تصادفي انتخاب گرديدند. براي اندازه گيري پتانسيل آنتي اكسيداني تام سرم موش از روش TRAP، ميزان كاهش جذب ماده فلورسانت R-فيكواريترين در حضور راديكال AAPH و سرم خون بوسيله اسپكتروفلوريمتر اندازه گيري شد. در روش FRAP، افزايش جذب كمپلكس -TPTZكلريدآهن (III) توسط آنتي اكسيدان موجود در سرم در طول موج 593 نانومتر بوسيله اسپكتروفتومتر اندازه گيري گرديد. نتايج بدست آمده از هر دو روش با استفاده از استاندارد Trolox به واحد ?mol Trolox equivalent/L تبديل گرديد.

Background: Because of the difficulty in measuring each antioxidant component separately and the interactions among different antioxidant components in the serum or plasma, several methods have been developed to assess the total antioxidant capacity. The objective of the present study was to evaluate and compare the total Radical-Trapping Antioxidant Potential (TRAP) and Ferric Reducing Ability of Plasma (FRAP) methods for assessing the total antioxidant capacity of rat serum. Materials and methods: Serum samples were obtained from 10 healthy male Wistar rats (8 weeks, 190 ± 5 g). The total TRAPs were determined based on the protection afforded by antioxidants against the decay of R-Phycoerythrin fluorescence emission during a controlled peroxidation reaction initiated by AAPH. The FRAP was determined based on the reduction of the ferric tripyridyltriazine [Fe(III)–TPTZ] complex to the ferrous tripyridyltriazine [Fe(II)–TPTZ] at low pH. The Fe(II)–TPTZ complex gives a blue color with an absorbance maximum at 593 nm. The final results were converted to ?mol Trolox equivalents/L. Results: The total antioxidant capacity of rat serum, measured by TRAP or FRAP methods was stable over a 4-week time period. The value of total antioxidant capacity of rat serum determined by TRAP method was three folds higher than that of FRAP method. The main contributors to rat serum TRAP and rat serum FRAP were albumin (30.33%) and uric acid (57.13%) respectively. The amount of contribution of ?-carotene in rat serum TRAP was 7.22 % and in rat serum FRAP was 0%. Conclusion: The antioxidant capacity of an antioxidant against a free radical does not necessarily equal with its ability to reduce Fe(III) to Fe(II).