مقايسه تعداد قارچ هاي شكمبه اي در محيط كشت حاوي كنجاله آفتابگردان عمل آوري شده با فرمالدييد و يا سود با روش PCR رقابتي

The Comparison of Rumen Fungi Quantification in the Medium Containing Sunflower Meal Treated with Formaldehyde and or Sodium Hydroxide by Using Quantitative Competitive PCR

روش PCR رقابتي كمي براي مقايسه تعداد قارچ هاي بي هوازي شكمبه در محيط كشت خالص قارچ حاوي كنجاله آفتابگردان پرچرب (165 گرم چربي در هر كيلوگرم ماده خشك) عمل آوري شده با فرمالدييد و سود انجام شد. 21 راس گاو هلشتاين (5±30 روز شيردهي) انتخاب و با جيره هاي آزمايشي كه شامل كنجاله آفتابگردان تيمار نشده (شاهد) و تيمار شده با 4 درصد هيدروكسيد سديم و 3/0 و 6/0 درصد فرمالدييد بودند، براي مدت 7 هفته تغذيه شدند. به منظور بررسي كمي جمعيت قارچ هاي بي هوازي شكمبه تحت تيمارهاي تغذيه اي از روش PCR رقابتي استفاده گرديد. قطعه استاندارد در واكنش PCRرقابتي از ژنوم فاژ لامبدا ساخته شد و تكثير همزمان با راندمان يكسان اين قطعه با قطعه DNA قارچ در يك واكنش PCR مورد ارزيابي قرار گرفت. از شدت نسبي باندهاي قطعه DNAالگو و كنترل استاندارد به منظور بررسي كمي جمعيت قارچ هاي بي هوازي شكمبه تحت جيره هاي مختلف استفاده گرديد. آناليز داده هاي مطالعه اخير نشان داد كه كنجاله آفتابگردان عمل آوري شده با سود، تعداد قارچ در محيط كشت را نسبت به شاهد افزايش، اما كنجاله آفتابگردان عمل آوري شده با فرمالدييد تعداد قارچ را كاهش داد (05/0(p < . بنابراين، به نظر مي رسد كه روش PCR رقابتي براي شمارش جمعيت قارچهاي شكمبه تحت تيمارهاي خوراكي مختلف، مناسب باشد.

The method of quantitative competitive polymerase chain reaction (QC-PCR) was conducted to compare the number of rumen anaerobic fungi in pure culture of fungi containing high fat sunflower meal (165 g fat/kg DM) processed with formaldehyde and NaOH. Twenty one multiparous early lactating Holstein cows (30±5 days of lactation) selected and fed experimental diets for 7 weaks. The diets were including untreated sunflower meal (control, n=3) and treated 4 % sodium hydroxide (n=3) and treated with 0.3 and 0.6 % formaldehyde (n=3). Competitive PCR technique was used to evaluate quantitative difference of anaerobic fungal population in the rumen under the dietary treatments. Standard control DNA was constructed from lambda phage for use in the competitive PCR and was shown to amplify under the same reaction condition and with the same amplification efficiency as the target DNA. The relative intensities of PCR products were used to evaluate variety of fungal population under fed treatments. The analysis of data of present study showed that NaOH treated sunflower meal increased and formaldehyde treated sunflower meal decreased number of fungi in medium compared to control. Therefore it seems that QC-PCR method has appropriate efficacy for enumerating rumen fungal population under the effect of dietary treatments.