مطالعه چندشكلي اگزون2 ژن GOLA-DRB3 در بز ندوشن با استفاده از روش PCR-RFLP

The Polymorphism of Exon 2 of GOLA-DRB3 Gene in Nadushan Goat Using PCR-RFLP

اين پژوهش به منظور بررسي چند شكلي ژن GOLA-DRB3 با استفاده از PCR-RFLP در بز ندوشن صورت گرفت. در اين طرح، از 100 بز به صورت تصادفي خونگيري شد. سپس DNA نمونه هاي خون دام ها با استفاده از كيت DIAtom DNA pr استخراج گرديد. براي تعيين كميت و كيفيت آن از ژل آگارز يك درصد و اسپكتروفتومتر استفاده شد. ناحيه اگزون 2 جايگاه GOLA-DRB3 به طول bp285 با روش Heminested-PCR در دو مرحله تكثير و محصولات PCR توسط آنزيم Taq برش داده شدند. محصولات هضم شده توسط الكتروفورز با ژل اكريل آميد10% يا 2% و رنگ آميزي اتيديوم برومايد آشكار گرديد. نتايج هضم محصولات PCR با آنزيم TaqI شامل دو قطعه bp163 و bp 122 (الگوي هضمي T) يا قطعه هضم نشده bp 285 (الگوي هضمي t) بود. جمعيت از لحاظ ژن GOLA-DRB3 انحراف از تعادل هاردي- واينبرگ را نشان نداد (p > 0.05). شاخص شانون، شاخص نيي، هتروزايگوسيتي مشاهده شده و مورد انتظار به ترتيب 68/0، 49/0، 55/0 و 49/0 محاسبه گرديد. با توجه به نتايج حاصله كارايي نشانگر GOLA-DBR3 جهت تعيين تنوع ژنتيكي خوب است. با استفاده از نتايج اين پژوهش و پژوهش هاي قبلي و با در دست داشتن ركوردها واطلاعات كمي جايگاه در اين جمعيت، مي توان شناسايي و تعيين محل جايگاه هاي موثر بر صفات كمي را انجام داد.

This study was conducted to determine polymorphism of GOLA-DRB3 in Nadushan goat using PCR-RFLP. Blood samples were randomly taken from 100 goats. DNA was extracted from the blood samples using DIAtom DNA prep Kit. Spectrophotometer and 1% agarose gel were used for determining its quantities and qualities. Exon 2 of DRB 3.2 gene encompassing 285 bp was amplified with heminested-PCR method in two rounds and PCR products were digested with TaqI. Digested PCR products were electrophoresed in 10% Acryl Amide gel or 2% Agarose gel and gels stained with ethidium bromide. Digested PCR products with TaqI included 2 fragments at 122bp and 163bp (T restriction pattern) or undigested fragment at 285bp (t restriction pattern). Population was in Hardy-Weinberg equilibrium (p > 0.05). Shanon index, Nei index, observed and expected heterozygosity were 0.68, 0.49, 0.55 and 0.49, respectively. With regard to results of this study, GOLA-DRB3 marker has good efficiency for genetic diversity determining. Using results of this study and former studies and records and quantitative information of locus in this population, we can perform determining and identifying QTL.