ارزيابي روش الايزاي نقطه اي در تشخيص ديكروسليازيس در گاو

Evaluation of Dot-ELISA method in diagnosis of cattle dicrocoeliasis

ديكروسليوم دندريتيكوم در زمره ترماتودهاي ديژنه آ مستقر در مجاري صفراوي نشخوار كنندگان است كه در بعضي مناطق ايران نظير استان هاي شمالي كشور، در صد بالايي از جمعيت دامي مذكور به آن آلوده اند. هدف از بررسي حاضر ارزيابي يكي از روش هاي تشخيص سرمي با استفاده از دو پادگن مختلف كرم بالغ در آلودگي طبيعي گاو به اين ترماتود كبدي بود. بدين منظور طي بازرسي كشتارگاهي نمونه هاي مثبت و منفي سرمي ( از هر مورد 40 نمونه ) با استفاده از دو پادگن بدني و دفعي ترشحي به روش الايزاي نقطه اي آزمايش شد. براي تهيه پادگن ها بعد از مراجعه به كشتارگاه، كبدگوسفندهايي كه به ديكروسليوم آلوده بودند به آزمايشگاه منتقل گرديد و كرم هاي بالغ از آن جدا شد. پادگن بدني با هموژنيزاسيون و پادگن دفعي ترشحي با انكوباسيون ترماتودهاي بالغ تهيه گرديد. روش الايزاي نقطه اي با استقرار پادگن ها بر روي كاغذ نيتروسلولز و انكوباسيون در مجاورت سرم هاي تحت آزمايش و سپس سرم كونژوگه انجام شد. حساسيت و ويژگي آزمون الايزاي نقطه اي با استفاده از پادگن بدني 5/75% و 77% و در استفاده از پادگن دفعي ترشحي 5/64% و 87% بود. ارزش پيشگويي مثبت و منفي در استفاده از پادگن بدني و دفعي ترشحي به ترتيب 77%، 5/75% و 87%، 5/64% ارزيابي گرديد. با توجه به نتايج بدست آمده در اين تحقيق پيشنهاد مي شود بعد از شناسايي پادگن اختصاصي جهت تشخيص آلودگي با ديكروسليوم دندريتيكوم كارايي آن در روش هاي مختلف سرمي بررسي شود تا بتوان روش تشخيصي مناسب در غربالگري موارد آلودگي معرفي كرد.

Dicrocoeliasis is a parasitic disease caused by digenean tremarode Dicrocoelium dendriticum . The serological diagnosis of this helmenthic disease can be made by different techniques. In the present study the Dot-ELISA (Dot – Enzyme linked immunosorbent assay) was used for serodiagnosis of naturally infected cattle. Adult Dicrocoelium dendriticum obtained from the liver of naturally infected sheep were washed in cold phosphate buffer saline (PBS, pH=7.4) and stored at -20 °c. To detect antibody in sera, somatic and excretory-secretory (ES) antigens of mature trematode were used. Somatic and ES antigens prepared with haemogenization and incubation of mature trematode, respectively. For diagnostic purposes 40 positive and 40 negative cattle sera after confirmed by slaughtered were tested. Diagnostic sensitivity and specificity values for Dot – ELISA using somatic and ES antigens were: 75.5 %, 77 % and 64.5 %, 87% respectively. Positive and negative predictive values for somatic and ES antigens were 77 %, 75.5 %, and 87 %, 64.5 % respectively. Cross reactivity occurred with hydatid cyst (2 cases) and Fasciola (3 cases). Our findings suggested that using specific antigens for serodiagnosis of dicrocoeliasis in ruminant, particularly sheep in Iran is a primary screening test.