باززايي گياه انگور (Vitis vinifera L.) از طريق جنين زايي رويشي با استفاده از ريز نمونه گل كامل

Grapevine (Vitis vinifera L.) Regeneration Via Somatic Embryogenesis from whole Flower Explant

ريزنمونه‌هاي گل كامل ارقام ياقوتي، شاهرودي، فليم سيدلس، بيدانه سفيد و عسكري به منظور توليد كالوس جنين زا و جنين سوماتيكي در دو زمان مختلف جمع آوري شدند. براي توليد كالوس جنين زا از محيط كشت MS به همراه 5 و 10 ميكرومولار 2,4-D و يك و دو ميكرومولار BAP استفاده شد. جهت تمايز جنين از محيط كشت MS به همراه نيم ميلي گرم IBA، محيط كشت MS بدون هورمون، محيط كشت MS به همراه 2ميلي گرم IBA و 2/0 ميلي گرم BAP، محيط كشت MS به همراه پنج ميكرومولار 2,4-D و يك ميكرومولار BAPو محيط كشت MS به همراه 2 ميلي گرم در ليتر BAP استفاده شد. در مرحله جوانه زني از دو محيط كشت MS و NN و تيمار سرمايي 4 درجه سانتي گراد بمدت دو هفته استفاده شد. نتايج نشان داد كه ريز نمونه‌هاي گل كامل جمع آوري شده در زمان اول، كالوس جنين زا و جنين سوماتيكي بيشتري در همه ارقام مورد مطالعه ايجاد كردند. پاسخ گياهان به محيط كشت براي توليد كالوس جنين زا تحت تاثير رقم قرار گرفت، بطوريكه ارقام بيدانه سفيد، ياقوتي و فليم سيدلس بيشترين درصد توليد كالوس جنين زا را در محيط كشت MS به همراه پنج ميكرومولار 2,4-D و يك ميكرومولار BAP توليد كردند، در حاليكه رقم شاهرودي در محيط كشت MS به همراه پنج ميكرومولار 2,4-D و دو ميكرومولار BAP و رقم عسكري در محيط كشت MS به همراه 10 ميكرومولار 2,4-D و دو ميكرومولار BAP بيشترين كالوس جنين زا را ايجاد كردند. پاسخ گياهان به محيط كشت در مرحله تمايز يابي به ژنوتيپ بستگي داشت، بطوريكه هر رقم در محيط كشت ويژه اي بيشترين درصد جنين سوماتيكي توليد كرد. در مرحله جوانه زني و توليد گياهچه ارقام بيدانه سفيد، ياقوتي و شاهرودي در محيط كشت MS به همراه يك ميكرومولار BAP و بدون سرمادهي جنين‌ها و ارقام عسكري و فليم سيدلس در محيط كشت MS به همراه يك ميكرومولار BAP و با سرمادهي جنين‌ها بيشترين جوانه زني و توليد گياهچه را داشتند.

To produce embryogenic callus and somatic embryo, whole flower explants were collected at two sampling stages of I, III. To produce embryogenic callus and somatic embryo, MS medium supplemented with 5 and 10µm 2,4-D and 2µm BAP were used. For embryo differentiation, MS medium with 0.5mg/l IBA, MS medium without any plant growth regulators, MS medium with 2mg/l IBA and 0.2mg/l BAP, MS medium with 5µm 2,4-D and 1µm BAP and finally MS medium with 2mg/l BAP were used. At embryo germination stage, MS medium with 1mg/l BAP and NN medium and cold treatment for 2 weeks were used. Results showed that in all studied cultivar, collection of whole flower explant at first sampling time resulted in highest percent of embryogenic callus and somatic embryo production. Response of explant to media were affected by Genotype, as Yaghouti, Bidaneh Sefid and Flame Seedless in MS medium supplemented with 5µm 2,4-D and 1µm BAP produced highest percent of somatic embryogenic callus. However, Shahroodi did better in MS medium supplemented with 5 or 2µm BAP, and Askari respond well to MS medium supplemented with 10µm 2,4-D and 2µm BAP. Once again, at embryo differentiation stage, each cultivar produced highest percent of somatic embryo in particular medium. For embryo germination and plantlets production, MS medium supplemented with 1µm BAP without chilling was best for Bidaneh Sefid, Yaghouti and Shahroodi, whereas Askari and Flame Seedless did best embryo germination and plantlet regeneration in MS medium supplemented with 1µm BAP accompanied by chilling treatment.