ارزيابي آنتي‌ژن‌هاي كيست هيداتيك در تشخيص هيداتيدوز به روش الايزاي نقطه‌اي

Evaluation of hydatid cyst antigens for diagnosis of hydatidosis by dot-ELIZA method

الايزاي نقطه اي يكي از روشهاي تشخيص كيست هيداتيك است كه حساسيت و ويژگي بالايي دارد. در اين تحقيق، پنج آنتي ژن مختلف براي تشخيص كيست هيداتيك به روش الايزاي نقطه اي با هم مقايسه شدند. اين آنتي ژن ها، آنتي ژن هموژنيزه پرتواسكولكس (HPA) ، آنتي ژن ديواره داخلي كيست (HLA) و آنتي ژنهاي مايع كيست شامل: آنتي ژن خام (CHFA)، آنتي ژن جوشانده (BAB) و آنتي ژن اتوكلاوه (AAB) بودند. براي انجام آزمون ابتدا آنتي ژن ها بر روي غشا نيتروسلولز قرار داده شدند، سپس مرحله مسدود سازي با سرم آلبومين گاوي 3% به مدت يك ساعت انجام گرفت. پس از شستشو با فسفات بافر سالين، غشا براي يك ساعت در آنتي بادي اوليه (سرم مشخص از نظر آلودگي) و بعد از شستشوي مجدد با PBS، در آنتي بادي ثانويه (آنتي‌بادي گونژوكه با پراكسيداز) قرار گرفت. براي قرايت نتايج كه با رنگي شدن محل استقرار آنتي ژن مشخص مي‌شد، از سوبستراي دي آمينو بنزيدين (DAB) استفاده گرديد. نتايج بررسي حاضر نشان داد حساسيت و ويژگي آنتي ژن ها به ترتيب در مايع خام (8/54% و 1/39%)، در مايع جوشانده (8/54% و 5/56%)، در مايع اتوكلاو شده (2/45% و 4/67%)، در پروتواسكولكس (6/78% و 4/30%) و در ديواره (1/57% و 50%) مي باشد. در اين بررسي دو آنتي ژن هموژنيزه پروتواسكولكس و مايع اتوكلاو شده به ترتيب بالاترين حساسيت و ويژگي را نشان دادند. براي افزايش دقت در تشخيص هيداتيدوز بهتر است ابتدا نمونه هاي سرمي با يك آزمون با حساسيت بالا آزمايش شوند و سپس از آزموني استفاده شود كه داراي ويژگي بالاتري باشد.

Dot-ELISA is one of the diagnostic methods for hydatidosis that has high susceptibility and known factor. In the present study, five antigens were compared by dot-ELISA for diagnosing hydatid cyst. These antigens were homogenated protoscolex antigen (HPA), hydatid layer antigen (HLA) and antigens of fluid hydatid cyst: crude hydatid fluid antigen (CHFA), autoclaved antigen B (AAB) and boiled antigen B (BAB). TO examin every sample, first the antigens was set on the nitrocellulose membrane. Then, this membrane was placed in bovine albumin serum (BSA) %3 for blocking for an hour. After washing the membrane in PBS, it was placed in the first antibody (definite for infection) for an hour. After re-washing with PBS, it was placed in the second antibody that conjugated with peroxides. Then di-amino benzidine (DAB) substrate was used for reading the results that were recognized with color spots in places of antigens. The results show these antigens have different susceptibility and they are specific in dot-ELISA: CHFA (54.8% &39.1%), BAB (54.8% &56.5%), AAB (45.2% & 67.4%), HPA (78.6% &30.4%) and HLA (57.1% &50%). Protoscolex antigen has the highest susceptibility and AAB has the highest attributes. To increasing accuracy in hydatid diagnosis, it is better to test serum samples with a high susceptibility test and then a test may be applied with the higher susceptibility.