تعيين اثر عصاره اكاليپتوس بر تكثير ويروس هرپس سيمپلكس در كشت سلول كليه نوزاد هامستر

The Inhibitory Effects of Eucalyptus Extract on Herpes Simplex Virus-1 Replication in Baby Hamster Kidney Cells

زمينه و هدف: در سالهاي اخير با افزايش سويه‌هاي مقاوم به دارو در انواع ويروس‌ها، يافتن مواد طبيعي با خواص ضد‌ ويروسي كه داراي اثرات جانبي كمتري باشند، مورد توجه محققين قرار گرفته است. اكاليپتوس از تيره مورد است كه داراي اثرات مختلف درماني از جمله اثر ضد‌ باكتريايي و ضد قارچي مي‌باشد. لذا اين مطالعه با هدف تعيين حداقل غلظت كشنده عصاره هيدروالكلي اكاليپتوس روي ويروس هرپس سيمپلكس در كشت سلولي صورت گرفت. روش بررسي: در اين مطالعه تجربي، ابتدا عصاره هيدروالكلي برگهاي اكاليپتوس به روش خيساندن با اتانول 70% تهيه شد. سپس سلول (Baby Hamster Kidney) BHK در محيط كشت حاوي 5% سرم جنين گوساله در ميكروپليت‌هاي 48 خانه‌اي كشت داده شد. پس از تعيين سميت سلولي 50% (Cytotoxic Concentration50, CC50) عصاره بر روي سلول‌هاي BHK، اثر ممانعت‌كنندگي 50% (Inhibitory concentration, IC50) آن بر تكثير ويروس هرپس سيمپلكس نوع 1 (HSV1) در دو مرحله (جلوگيري از اتصال و تكثير بعد از اتصال) ارزيابي شد. اطلاعات به‌ دست آمده به كمك آزمون پروبيت در هر مرحله محاسبه گرديد. يافته‌ها: بر‌اساس آناليز پروبيت، CC50 عصاره mg/ml650/0 تعيين شد. مدل پروبيت ارتباط معني‌داري بين غلظت عصاره اكاليپتوس و مرگ سلول‌ها نشان داد (001/0 > p). براساس آناليز پروبيت، IC50 عصاره براي مرحله قبل از اتصال ويروس برابر g/mlµ82/456 و براي مرحله تكثير بعد از اتصال برابر g/mlµ75/180 به‌دست آمد. همچنين با افزايش غلظت عصاره، درصد مهار CPE در هر دو مرحله افزايش يافت (01/0 < p). نتيجه‌گيري: طبق نتايج اين مطالعه، عصاره هيدروالكلي اكاليپتوس احتمالاً يك داروي گياهي مناسب با اثرات ضد هرپسي است كه در ‌صورت انجام مطالعات تكميلي مي‌توان از آن به‌عنوان يك داروي جايگزين يا مكمل استفاده نمود.

Background and Objectives: In recent years, following the increasing of drug resistant strain of viruses, there has been an increasing interest in the use of natural substances with antiviral activity and low side effects. One of these herbal medicines, Eucaliptus, has shown some therapeutic effects including antibacterial and antiviral activities. Therefore, this study aimed to determine the minimum inhibitory concentration of hydroalchoholic extract of Eucaliptus on Herpes simplex virus-1 (HSV-1) in vitro. Methods: In this experimental study, the hydroalchoholic extract of Eucalyptus leaves was prepared using 70% ethanol through maceration method. Baby Hamster Kidney (BHK) cells were grown in monolayer culture with Dulbeccoʹs modified Eagleʹs medium (DMEM) supplemented with 5% fetal calf serum and plated onto 48-well culture plates. 50% cytotoxic concentration (CC50%) of the extract on BHK cells was determined, and subsequently 50% inhibitory concentration (IC50%) of the herbal extract on replication of HSV-1 both in extracellular and intracellular cases was assessed. Results: Based on Probit analysis, CC50% of the extract was 0.650mg/ml. Significant relationships between the concentration of the extract and cell death in the cell studied were shown using the Probit model (p < 0.01). IC50s of the extract on the virus before cellular attachment and after entering the cells were 456.82µg/ml and 180.75µg/ml, respectively. Based on the model, with increasing the extract concentration, the percentage of inhibition of cytopathic effect (CPE) in both stages was increased (p < 0.05). Conclusion: Based on the findings of this study, hydroalchoholic extract of Eucaliptus could be probably an appropriate anti herpetic herbal medicine.