مقايسه مقادير پروتيين هاي سطحي كانديدا با استفاده از رنگ آميزي نقره، كوماسي بلو و مخلوط هر دو رنگ و مشاهده باندهاي مربوطه با استفاده از روش SDS-PAGE

Examining Cell Wall Proteins In Candida Albicans And Candida Dubliniensis By Using Sodium DodecyleSulphate Gel Electrophoresis & Modified Staining Method

زمينه و هدف: گونه‌هاي كانديدا بعنوان شايعترين عوامل بيماريهاي عفوني و قارچي فرصت طلب مطرح هستند. كانديدا آلبيكنس بعنوان نوعي قارچ پلي مورف مطرح است. كانديدا دابلينينسيس بعلت تشابه بسيار با قارچ كانديدا آلبيكنس حايز اهميت است. پروتيين‌هاي ديواره نيز مي‌توانند در ساختار ديواره وجود داشته باشند. اين پروتيينها بعلت نقش در چسبندگي و اتصال به سلولهاي ميزبان و بيماري زايي مورد تاكيد مطالعات بوده است. لذا شناخت اين پروتيينها در قارچ‌هاي پاتوژن و استخراج و جدا سازي و تعيين اجزاي آنها ضروري به نظر مي‌رسد. روش بررسي: هدف از اين طرح بررسي مقادير پروتيين‌هاي سطحي كانديدا آلبيكنس و كانديدا دابلينينسيس با استفاده از سه رنگ آميزي و مشاهده باند احتمالي آنها با روش سديم دودسيل سولفات- پلي آكريل آميد(SDS-PAGE) به‌ منظور شناخت بيشتر اين قارچهاي بيماريزا مي‌باشد. همچنين با استفاده از بافركربنات آمونيوم كه شامل بتامركاپتواتانول است پروتيينهاي سطحي كانديدا استخراج مي‌شوند و پس از استخراج انجام دياليز نيز ضروري است. يافته‌ها: با رنگ آميزي كوماسي بلو پروتيينهايي با وزن مولكولي42 و 2/66 و200 kDaو در رنگ آميزي با نقره پروتيين‌هايي با وزن مولكولي 5/21 و 5/28 و37 kDa و با استفاده از رنگ آميزي توام كوماسي بلو و نقره پروتيين‌هايي با وزن مولكولي 27 و 35 و40 و 45 و52 و 80 و 97kDa تشخيص داده شد. نتيجه‌گيري: با رنگ آميزي كوماسي بلو پروتيينهايي با وزن مولكولي بالا و در رنگ آميزي با نقره پروتيينهايي با وزن مولكولي پايين و با مخلوط هر دو رنگ بيشتر باندهاي پروتيين مشاهده شدند. واژه‌هاي كليدي: كانديدا آلبيكنس، كانديدا دابلينينسيس، استخراج پروتيين، SDS-PAGE

Background and Aim: Candida species are among the most common causes of opportunistic fungal diseases. Among Candida species, Candida albicans is responsible for most infections. Having many strains, C.albicans is highly polymorph. C. dubliniensis is very similar to albicans species both morphologically and physiologically. For an infection to occur, cell wall proteins play an important role as they enable yeasts to adhere to host cells and begin pathogenesis. Therefore, we decided to extract these proteins and examine them through molecular methods of protein analysis. Finally we came up with the idea of a modified staining in our analysis. Materials and Methods: Initially cell wall proteins of two C. albicansstrains (CBS 562 & PTCC6027) and one C. dubliniensis strain (CBS 7987) were extracted by using a solution of beta-mercaptoethanol and ammonium carbonate. After dialysis, SDS gel electrophoresis was performed on the protein extract. Bands were then visualized by using three different staining methods among which one method was modified by us. Results: By using Coomassie Brilliant Blue staining method, proteins with molecular weight of 42, 66.2 and 200 kDa were detected. By using Silver staining method, proteins with molecular weight of 21.5, 28.5 and 37 kDa were detected. However, using combined staining methods visualized more bands resulting improved detection. Conclusion: To answer many questions about fungal diseases, fungi cell wall proteins are necessary to be examined. A simple method to enhance such molecular studies is the use of a modified staining method that combines both Coomassie Brilliant Blue and Silver staining. Key words: Candida Albicans, C. Dubliniensis, Protein Extraction, SDS-PAGE