تشخيص سريع كمپلكس مايكوباكتريوم توبركولوزيس توسط تكنيك تكثير هم دما به واسطه حلقه

چكيده سابقه و هدف: تشخيص دقيق و سريع، يكي از مسايل مهم در كنترل بيماري سل مي باشد. تكثير هم دما به واسطه حلقه (LAMP)، تكنيكي ساده و سريع براي تكثير اسيد نوكلييك است. در اين مطالعه، به بررسي تكنيك LAMP پايه گذاري شده بر اساس توالي ژني IS6110 در تشخيص مايكوباكتريوم توبركولوزيس (MTB) پرداخته شد. روش بررسي: تعداد 155 نمونه خلط از بيماران مشكوك به سل جمع آوري شد. 6 پرايمر اختصاصي براي تكنيك LAMP طراحي گرديد و واكنش LAMP تحت شرايط بهينه انجام شد. حساسيت و ويژگي تكنيك LAMP جهت تشخيص كمپلكس مايكوباكتريوم توبركولوزيس مورد بررسي قرار گرفت. يافته ها: واكنش LAMP، در دماي 66 درجه سانتي گراد و مدت زمان 60 دقيقه با موفقيت انجام شد. محدوديت تشخيصي LAMP، fg 5 از DNA معادل يك كپي از ژنوم مايكوباكتريوم توبركولوزيس بود. حساسيت و ويژگي اين روش در نمونه هاي باليني به ترتيب 100% و 9/95% محاسبه گرديد. نتيجه گيري: تكنيك LAMP روشي سريع، حساس و كم هزينه براي تشخيص مايكوباكتريوم توبركولوزيس مي باشد كه مي توان از آن به طور روتين در مراكز تشخيص سل استفاده كرد.

Abstract Background: Rapid and efficient diagnosis is one of the crucial issues in the control of tuberculosis. Loop mediated isothermal amplification (LAMP) is a simple and rapid technique for nucleic acid amplification. In this study, we evaluate a LAMP assay targeting IS6110 gene for diagnosis of M. tuberculosis in clinical samples. Materials and Methods: 155 clinical sputum specimens were collected from suspected patients with tuberculosis. Six specific primers were designed for LAMP assay. LAMP reaction was performed under optimal condition. Sensitivity and specificity of LAMP were determined. Results: A successful LAMP reaction with newly designed primers was carried at 66?C for 60 minutes. The detection limit of LAMP was 5fg DNA per tube. The sensitivity and specificity of this assay in clinical sputum samples were 100% and 95.9%, respectively. Conclusion: LAMP is a rapid, sensitive and low cost technique that can be suitable for routine usage in diagnosis of TB.