تشخيص سريع بيماري مارك در ماكيان با استفاده از PCR

Rapid Diagnosis of Marekʹʹs Disease in Chicken by Using a PCR Method

هدف از انجام اين مطالعه، بررسي كارآيي يك روش سريع PCR جهت تشخيص طيور آلوده به بيماري مارك كه قبلاً مثبت بودن آلودگي آنها با استفاده از بررسي هاي هيستوپاتولوژيك محرز شده، ميباشد كه مبناي اين تكنيك بر اساس شناسايي يك قسمت از ژنوم ويروس بنام قطعات ژني تياميدين كيناز، از باز 597 تا 807 را كه توانايي شناسايي مستقيم MDV در سلولهاي كليه و ساير بافتهاي ماكيان آلوده به اين ويروس را ممكن ميسازد، استوار است. طي اين مطالعه 12687 قطعه طيور گوشتي كشتار شده در كشتارگاه صنعتي طيور اروميه مورد بررسي كالبدگشايي قرار گرفتند. پس از بررسي لاشه هاي طيور در 8 مورد از آنها ضايعات بيماري مارك، شامل ندولهاي مشخص لنفوييدي جلدي و احشايي ناشي از لنفوپروليفراسيون بيماري مارك مشاهده گرديد كه جهت مطالعات ميكروسكوپيك ضايعات، از اين تعداد نمونه برداري به عمل آمد. پس از تهيه اسلايد و رنگ آميزي هماتوكسيلين -ايوزين، نمونه هاي مثبت بدست آمده از لاشه هاي مبتلا به بيماري مارك، جهت بررسي با PCR با روش بررسي ژن تياميدين كيناز مورد استفاده قرار گرفتند. در اين مطالعه نمونه هايي از سلولهاي بورس فابريسيوس، پر و كليه طيور مشكوك استفاده گرديد. اين روش داراي سرعت بسيار بالايي بوده و براي اين تكنيك نيم ساعت براي تهيه نمونه، 3 ساعت جهت انجام PCR و 1 ساعت براي الكتروفورز زمان صرف شد. پس از بررسي از 8 نمونه PCR شده، تعداد 7 نمونه مثبت و يك نمونه به همراه نمونه شاهد منفي شناسايي گرديد. نتايج بدست آمده نشان ميدهند كه از آزمايشهاي هيستوپاتولوژيك و PCR با يكديگر همخواني كامل داشته اند

The main aim of this study was to evaluate a new PCR method for diagnosis of Marekʹs disease that uses a part of MDV viral genome named Thyamidine kinase (from base 597 to 807) and it could be found in MDV RB1B and its serologic dependent vaccine HVT Fc-126. High performance and time providence in this method makes it a good diagnostic tool for using in laboratories. This is a rapid method that users need only half an hour for sample preparation, 3 hours for PCR and 1 hour for electrophoresis. During this survey 12687 slaughtered broilers in poultry slaughterhouse were studied. Eight macroscopic & microscopically cases found positive showing MD changes after necropsy. After preparing & staining slides with Hematoxilin & Eosin, sampled broilers had histopathologic changes in skin, liver and spleen. In all 8 cases lymphoid tumors found in skin, in 3 cases in liver and in 1 case lesion were found in spleen. After applying PCR method and electrophoresis, in one of these samples (control) no nucleotide band observed in 200bp area and this case marked negative but it was positive in other 7 histopathologically samples and distinct nucleotide bands were formed in 200bp area