بررسي چند شكلي ژن كالپاستاتين در گاو هلشتاين و گاوميش به كمك روش PCR-RFLP

Study of polymorphism of Calpastatin gene in Holstein cattle and Buffalo using PCR-RFLP method

چكيده يكي از بهترين روش هايي كه مي تواند باعث بهبود صحت پيش بيني و پاسخ به انتخاب شود، انتخاب براساس نشانگرها است. ژن كالپاستاتين در بررسي افزايش وزن و كيفيت گوشت به عنوان ژن كانديدا شناخته شده است. اين ژن روي كروموزوم شماره 7 گاو قرار دارد كه در شكل گيري، تجزيه بافت عضلاني و تردي گوشت بعد از كشتار موثر است. به منظور بررسي چند شكلي ژن كالپاستاتين از 50 راس گاو هلشتاين موجود در شركت بهين تليسه واقع در كيلومتر5 جاده قديم گرگان-كردكوي و 40 راس گاوميش موجود در شركت كشاورزي و دامپروري ميانكاله (بهشهر) بطور تصادفي خونگيري به عمل آمد. استخراج DNA از خون تام به كمك روش بهينه يافته نمكي انجام گرفت و واكنش زنجيره پلي مراز (PCR) جهت تكثير قطعه 622 جفت بازي از اگزون و قسمتي از انترون 1 ناحيه L ژن كالپاستاتين انجام شد. هضم قطعه تكثير شده به وسيله آنزيم MSPI وجود دو آلل M و N را آشكار كرد. ژنوتيپ هاي MM، MN و NN بترتيب با فراواني هاي 46، 54 و 0 درصد براي گاو هلشتاين و فراواني هاي 0، 45 و 55 درصد براي گاوميش و فراواني آلل هاي M و N بترتيب73/0 و 27/0 براي گاو هلشتاين و فراواني آللي 225/0 و 775/0 براي گاوميش برآورد گرديدند. آزمون كاي- مربع تعادل هاردي-واينبرگ را در جمعيت هلشتاين نشان نداد )05/0(P < در صورتي كه اين تعادل در جمعيت گاوميش برقرار بود. با توجه به نقش كالپاستاتين بر كيفيت گوشت به نظر مي رسد اين ژن مي تواند بعنوان نشانگر مولكولي براي اصلاح كيفيت گوشت مورد استفاده قرار گيرد.

Abstract Marker assistant selection is one of the best methods to improve the accuracy of prediction and response to selection. In studies related to weight gain and meat quality Calpastatin gene has been identified as a candidate gene. This gene is located on cattle chromosome 7 and is effective on formation, lysis of muscle texture and meat tenderness after slaughtering animals. In order to study polymorphism of Calpastatin gene in Holstein cattle 50 animals from Behin Taliseh corporation were randomly sampled. DNA extraction was carried out by modified salting out method. Polymerase chain reaction was performed to amplify a 622bp fragment of the L region of exon and entron 1 of this gene. Restriction reaction of PCR products was done using MspI enzyme. Then all the animals were genotyped base on digested fragment profile, respectively. Frequencies of MM, MN and NN genotypes were 46%, 54% and 0% for Holstein cattle and 0%, 45% and 55% for Buffalo. Frequencies of M and N alleles were 0.73 and 0.27, respectively for Holstein cattle and 0.225 and 0.775 for Buffalo. Results showed that this locus was not at Hardy–Weinberg equilibrium in the Holstein cattle (P < 0.05) while Buffalo herd showed equilibrium.