بكارگيري تكثير با پرايمر اختصاصي الل ، در تشخيص زير گروههاي سيستم خوني Rh در بيماران تالاسمي

Application of Allele Specific Oligonucleotide (ASO) PCR in determination of Rh antigens

زمينه و هدف: تالاسمي يك بيماري ژنتيكي است كه بصورت كمبود نسبي يا كامل زنجيره‌هاي آلفا يا بتا گلوبين مي‌باشد. بيماران مبتلا در فرم متوسط و شديد خود از اوايل زندگي احتياج به تزريق خونهاي متعدد پيدا مي‌كنند. وقوع آلوايمونيزاسيون در برابر آنتي ژنهاي گروههاي خوني در مبتلايان به تالاسمي نسبتا بالاست و ممكن است مشكلات زيادي را در درمانهاي طولاني مدت و تزريقات بوجود بياورد. بوجود آمدن آلوآنتي بادي ضد اين گروههاي خوني موجب پيدايش مشكلات عديده منجمله آماده كردن خون سازگار براي تزريق مي‌شود. لذا تعيين دقيق آنتي ژنهاي گلبولهاي قرمز اين بيماران در كاهش آلوايميونيزاسيون، امري ضروري بنظر مي‌رسد. روش بررسي: در اين مطالعه، بصورت تصادفي از 40 نفر از بيماران تالاسمي، قبل از اقدام به تزريق خون، 4 سي سي خون محيطي در لوله هاي حاوي EDTA گرفته شد. همچنين از 10 نفر از افراد سالم كه سابقه هيچ تزريق خون نداشتند هم بعنوان كنترل نتايج سرولوژيكي (آگلوتيناسيون) و مولكولي وارد مطالعه شدند. تعيين فنوتيپ بيماران و گروه كنترل بوسيله گلبولهاي قرمز بيماران بروش آگلوتيناسون لوله‌اي طبق دستور بوسيله آنتي بادي هاي تجاري صورت گرفت. جهت انجام آزمايش مولكولي آزمون Allele Specific Oligonucleotide (ASO)PCR براي هر يك از آنتي ژنهاي مورد نظر در ميكروتيوب هاي جداگانه انجام شد. يافته‌ها : در اين مطالعه با استفاده از اللهاي اختصاصي هر الل در شرايط دمايي يكسان هر چهار ژن مورد بررسي تكثير شد. بعلاوه مقايسه نتايج بدست آمده از دو روش مولكولي و آگلوتيناسيون نشان داد كه در گروه شاهد كه سابقه هيچگونه تزريق خوني را نداشتند، نتايج مشابهي در دو روش فوتيپي و ژنوتيپي ديده شد، اما در گروه بيماران نتيجه بر خلاف گروه شاهد بود و نتايج اين دو روش در بسياري از نمونه‌ها تفاوت داشت. بحث و نتيجه گيري: مزيت اين روش نسبت به روشهاي ديگر مثل PCR-RFLP اينست كه هر چهار ژن در يك شرايط دمايي و غلظت، قابليت تكثير را داشته و بلا فاصله با انجام الكتروفورز تعيين پروفايل آنتي ژني فرد انجام مي‌شود و از طرفي ديگر هزينه و زمان زيادي كه در روش PCR-RFLP كه در آن پس از تكثير ژن، محصولات را در مدت خاصي تحت تاثير آنزيم قرار مي‌دهند را ندارد. لذا روش فوق بعلت سادگي روش و ارزاني نسبت به ساير روشها به مراكز درماني و تحقيقاتي پيشنهاد مي‌گردد.

Background and Aim: Thalassemia is a genetic disease whit relative or complete lack of alpha or beta globin chain. Patients with moderate and severe form need to have multitransfusion in early life. Occurrence of all immunization against blood group antigens in patients with thalassemia is relatively high and may have difficulties in treatment and transfusion. Antibody production against this blood groups cause lots of problems like preparation of compatible blood for transfusion. Correct diagnosis of blood group phenotype due to existence of dual population of donor and patient RBC would be difficult. Materials and Methods: In this study, randomly from 40 thalassemic patients, before blood transfusion, 4cc of peripheral blood collected in tubes containing EDTA. Also, 10 healthy individuals who had no history of blood transfusion were in the study as control for serological (agglutination) and molecular results . Phenotyping of patients and control group was done by tube agglutination method by commercial antibody. For molecular test, Allele Specific Primer Amplification (ASPA) PCR was performed for each antigens in separate micro tubes. Results: In this studyʹ we could set up a method that can amlify any of Rh C c E and E gene separately by a pair of specific primer in a same thermal conditions.Comparison of results of two methods showed that in the control group with no transfusion history. Similar results in phenotyping and genotyping was observed. But in patients, results of two methods had lots of differences. Discussion and Conclusion: The advantage of this method over PCR-RFLP method is thatʹ all four genes can be amplified the in a same concentration and temperature conditions, and ability to determine the individualʹs antigen, immediately by electrophoresis. Therefore, Since the above method is simple and inexpensive for medical and research centers it is recommended. Key words : Rh Group System, ASO-PCR , PCR-RFLP