مطالعه يك مورد سلول زدايي بافت لثه كامي انسان و آماده سازي مدلي سه بعدي (3D matrix) براي كاربرد در تحقيقات مقدماتي مهندسي بافت لثه

A Case Study of Decellularization of Human Palatal Gingiva Tissue and Preparation Three-Dimensional Model for Use in Primary Research Gingival Tissue Engineering

چكيده هدف: هدف اين تحقيق تهيه شبكه خارج سلولي (ماتريكس) سه بعدي از بافت لثه كامي و بررسي امكان كاربرد داربست‏هاي طبيعي (Scaffolds) تهيه شده در تحقيقات كشت سلولي و مهندسي بافت مي‏باشد. مواد و روش‏ها: به منظور تهيه داربست‏ها، بافت لثه كامي انسان به صورت بيوپسي تهيه و سلول زدايي به روش فيزيكي (قرار دادن در تانك ازت و شستشو با آب مقطر) شيميايي با درصدهاي متفاوتي ازسديم دودسيل سولفات SDS (غلظت هاي 1، 75/0، 5/0، 25/0 و 1/0 درصد) در 5 گروه انجام شد. سپس جهت تست داربست سلول زدايي شده با غلظت 1 درصد محلول SDS، از سلول‏هاي شبه جنيني بافت بلاستما براي كشت بر روي اين داربست سه بعدي استفاده گرديد. نتايج: كاهش درصد SDS به پايين تر از 5/0درصد به طور معني داري باعث كاهش سلول زدايي بافت شد (P < 0/05). مطالعه ميكروسكوپي در مورد بلاستما و داربست همراه آن در روزهاي مختلف كشت نفوذ سلولي، مهاجرت، چسبندگي و تمايز را نشان داد. نتيجه گيري: نتايج اين تحقيق نشان مي‏دهد كه امكان تهيه يك داربست طبيعي از بافت لثه كامي به وسيله تيمار با SDS وجود دارد. از طرف ديگر نتايج مطالعات هيستولوژيك نشان مي‏دهد كه داربست‏هاي سلول‏زدايي شده لثه كامي مي تواند همچون لثه آزاد داربست زيستي سه بعدي مناسبي براي حركت، تمايز، چسبندگي و مهاجرت سلول‏ها باشد. آزمايشات بيشتر جهت تعيين ماهيت سلول‏هاي تمايز يافته مي‏تواند به پيشرفت دانش ما در رابطه با بر هم كنش‏هاي سلول- ماتريكس كمك كنند. واژگان كليدي: بافت بلاستما، سديم دودسيل سولفات، ماتريكس خارج سلولي، مهندسي بافت

Abstract Aim: The main goal of this research was to prepare a three-dimensional matrix from gingival palate tissues and investigate the possible application of this scaffold in cell culture and tissue engineering. Materials and methods: In order to fabricate the scaffolds, the biopsy samples of human palate gingival tissue were preparated surgically and divided in 5 groups then decellulization of the samples were carried out via physical method (put in nitrogen tanks and rinsing with distilled water) as well as chemical method using different concentrations of SDS (0.1%, 0.25%, 0.5%, 0.75% and 1%). Furthermore to evaluate the scaffold prepared with 1% SDS, embryonic like cells from blastema tissue were seeded on the three-dimensional scaffold. Results: Concentration of SDS below 0.5% caused significant reduction (p < 0.05) of decellulization of the tissues. Microscopic studies of blastema tissue on the scaffold in different days revealed the penetration, migration, adhesion and differentiation of the cells. Conclusion: This study showed that, it is possible to prepare a natural scaffold frome palatal gingiva tissue using SDS treatment. On the other hand, the results of histologic studies showed that the decellulized scaffolds of palatal gingival might be suitable as three-dimensional bioscaffold for movement, adhesion, differentiation and migration of cells. More investigation is needed to determine the identity of the differentiated cells which further it can help to improve our knowledge about cell-matrix interaction. Key words: Blastema tissue, Decellulization, Palate gingiva tissue, Tissue engineering