تعيين مشخصات كيست‌هاي هيداتيد جدا شده از دام هاي كشتار شده در كشتارگاه صنعتي شهر ياسوج به روش PCR-RFLP

Characterization of Isolated Hydatid Cyst from Slaughtered Livestock in Yasuj Industrial Slaughterhouse by PCR-RFLP

زمينه و هدف: با توجه به وجود 10 ژنوتيپ مختلف از انگل اكينوكوكوس گرانولوزوس با ميزبان‌هاي واسطه و نهايي مختلف و اثرگذاري اين ژنوتيپ‌ها در چرخه زندگي انگل و انتقال آن به انسان، هدف اين مطالعه تعيين خصوصيات مولكولي جدايه‌هاي كيست‌هاي هيداتيد و انتشار آنها در كبد و ريه دام‌هاي كشتار شده در كشتارگاه صنعتي شهر ياسوج بود. روش بررسي: در اين مطالعه تجربي تعداد 93 كيست هيداتيد دامي‌(31 نمونه گوسفند، 56 نمونه بز و 6 نمونه گاو) از كشتارگاه صنعتي ياسوج جمع‌آوري شدند. DNA ژنومي‌از پروتواسكولكس‌هاي مربوطه با روش استاندارد فنل‌ـ كلروفـــرم استخراج گرديد.‌ قطعه‌ي rDNA-ITS1 هر كدام از نمونه ها به روش PCR با پرايمرهاي EgR وEgF، تكثير شد و محصولات PCR ابتدا با الكتروفورز بررسي و سپس با آنزيم هاي Alu I و Rsa I برش داده شده و محصولات PCR-RFLP قطعات مزبور الكتروفورز شده و مورد بررسي قرار گرفتند. يافته‌ها: با استفاده از روش PCR، اندازه قطعات rDNA-ITS1 تمام جدايه‌هاي كبدي و ريوي داراي باند‌هاي مشابه و اندازه bp1000 به ‌دست آمد. الگوي ايجاد شده با استفاده از آزمون RFLP با آنزيم‌ هايAluI و Rsa I ژنوتيپ G1 يعني همان ژنوتيپ گوسفندي اكينوكوكوس گرانولوزوس را نشان داد. نتيجه‌گيري: اين مطالعه نشان داد، سويه G1، سويه غالب ايجاد كننده بيماري كيست هيداتيد در اعضاي مختلف دام از جمله كبد و ريه در شهر ياسوج مي‌باشد.

Background & aim: Given the existence of 10 different genotypes of the parasite Echinococcus granulosus from different hosts and intermediate and final impact of these genotypes in the life cycle of the parasite and its transmission to humans, the purpose of this study was to determine the molecular characterization of isolates of hydatid cysts in industrial slaughterhouses of Yasuj city. Methods: In this study, 93 animal isolates (56 goat, 31 sheep and 6 cattle) were collected from the industrial slaughterhouse of Yasuj city. The genomic DNA corresponding to protoscolices was extracted, using the standard Phenol–Chloroform method. The fragment of DNA-ITSI of each sample was assessed by PCR with designed primers of EgF, EgR and then amplified. Moreover, the PCR products were assessed by electrophoresis and digested by the Alu I and Rsa I enzymes. RFLP products were evaluated by electrophoresis. Results: Using a PCR test, rDNA-ITSI of all isolates of similar size bands and 1000 bp were obtained respectively.The patterns generated by RFLP using Alu I and Rsa I enzymes, showed Echinococcus granulosus G1 genotype in all isolates. Conclusion: This study showed that strain G1 is the predominant strain causing hydatid cysts in different organs of the animal in Yasuj. Key words: Echinococcus granulosus, rDNA-ITSI, PCR-RFLP