مقايسه‌ي چهار نوع مختلف حامل براي رشد سلول Vero و تكثير ويروس هاري براي توليد واكسن هاري انساني

Comparison of Four Different Types of Carriers for the Growth of Vero Cells and Propagating Rabies Virus for Production of Human Rabies Vaccine

زمينه و هدف: در اين مطالعه توانايي سلول Vero براي رشد روي فيبراسل ديسك، و سه نوع ريز حامل(microcarrier) شامل سيتودكس-1 و سيتودكس-3 و سيگما سولوهيل در فلاسك‌هاي همزن دار با حجم 500 ميلي‌ليتر حاوي محيط كشت سرم دار Fetal Calf Serum (FCS))10% (DMEM+ و محيط كشت بدون سرم (VP-SFM) مورد مقايسه قرار گرفت. سپس تكثير سويه‌ي فيكس ويروس هاري PV (Pasteur Virus) در سلول‌هاي رشد يافته در شرايط فوق به منظور توليد واكسن هاري بررسي و مقايسه شد. روش بررسي: در فاز رشد از سامانه‌ي تعويض گامي محيط كشت (Stepwise Perfusion) استفاده شد و فاز توليد ويروس در سامانه‌ي ثابت (Batch) با استفاده از Bovine Serum (BSA) Albumin2/0%+ 199 Mبه‌عنوان محيط سرم دار و VP-SFM به عنوان محيط فاقد سرم انجام شد. مقدار ريز حامل استفاده شده بر حسب سطح (سانتي‌متر مربع) و تعداد سلول اوليه‌ي تلقيح شده به محيط كشت در آزمايش‌ها يكسان و به ترتيب برابر cm212000 و cells/cm2 12500تعيين گرديد. يافته‌ها: بيشترين تعداد سلول با استفاده از فيبراسل ديسك در محيط كشت DMEM برابر با cells/cm 106*7/0±1/7 در روز نهم به‌دست آمد در حالي‌كه كمترين تعداد سلول با استفاده از سيتودكس-3 در محيط كشت VP-SFM برابر با cells/cm106*2/0±91/2 حاصل شد. بيشترين تيتر ويروس هاري برابر با Fluorescent Focus Unit (FFU)/ml 106*4/4±18/55 در محيط كشت VP-SFM حاوي فيبراسل ديسك و كمترين تيتر در محيط M199 حاوي سيتودكس-3 برابر FFU/ml 106*4/0±66/3 حاصل شد. نتيجه‌گيري: در مجموع آزمايش‌ها فيبراسل ديسك بهتر از انواع ريز حامل رشد سلول‌ها را حمايت كرد و استفاده از DMEM براي رشد سلول و استفاده از VP-SFM براي توليد ويروس نتايج بهتري را نشان داد. واكسن تجربي تهيه شده با ويروس‌هاي جمع‌آوري شده از VP-SFM ايمني‌زايي (Potency) قابل قبول معادل IU75/2 داشت. با توجه به نتايج اين تحقيق و امكان توليد و روش ساده استفاده از فيبراسل ديسك، اين حامل براي كشت سلول Vero و به منظور تكثير ويروس هاري توصيه مي‌گردد.

Background and Objectives: In this study, capability of Vero cells for growth on FibraCel disks were compared on 3 kinds of microcarriers including Cytodex-1, Cutodex-3, and Sigma Solohill in 500 ml Spinner flasks in both serum contained medium (DMEM+10% Fetal Calf Serum, FCS) and serum-free medium (VP-SFM). The propagation of fixed PV (Pasteur Virus) strain of rabies in Vero cells, for production of rabies vaccine, grown under the above conditions were studied and compared. Materials and Methods: Stepwise perfusion mode in growth phase and batch mode were applied in the virus production step by the use of M199 +0.2% Bovine Serum Albumin (BSA) and VP-SFM as serum containing and serum-free media, respectively. The available surface area provided by the carriers, and primary cell density in the experiments were assumed the same (about 12,000 cm2 and 12,500 cells/cm2, respectively). Results: The highest cell density was achieved on FibraCel disks in DMEM equal to 7.1 ±0.7×106 cells /ml on day 9, while the lowest cell density was obtianed on Cytodex-3 in VP-SFM equal to 2.91 ±0.2×106 cells/ml. The highest virus titer (55.18 ±4.4×106 Fluorescent Focus Unit,FFU/ml) was gained in VP-SFM containing FibraCel disks, and the lowest titer (3.66 ±0.4 ×106 FFU/ml) was resulted on Cytodex-3 in M199. Conclusion: In these experiments, FibraCel disks supported the growth of Vero cells better than the microcarriers, and the use of DMEM for propagation of Vero cells and VP-SFM for proliferation of rabies virus showed better results. The experimental vaccine prepared by collected virus from VP-SFM has an acceptable potency of 2.75 IU. Based on these results and to the relative ease for making FibraCel disks, we recommend the use of this carrier for propagation of Vero cells and production of rabies virus. Keywords: Microcarrier, Cytodex, Fibracel disk, Vero, Rabies