كلونينگ، بررسي خصوصيات ملكولي و پيش‌بيني بيان مجازي ژن فيتاز phyC از باسيلوس سابتيليس

Cloning, nucleotide characterization and modeling expression of phytase gene phyC from Bacillus subtilis

فيتاز آنزيمي است كه اسيد فايتيك را هيدروليز و فسفر معدني توليد مي كند. يكي از منابع بيان كننده آنزيم فيتاز، باكتري ها هستند كه در اين ميان جنس باسيلوس مهم‌ترين باكتري توليدكننده فيتاز قليايي مقاوم به حرارت مي باشد. ژن فيتاز خارج سلولي باكتري باسيلوس سابتيليس phyC با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي و لينكردار حاوي سايت هاي برشي BamHI و HindIII جداسازي شد. به منظور انجام توالي يابي و بررسي خصوصيات، ژن تكثير شده phyC به ناقل pTZ57R/T انتقال داده شد. حضور ژن هدف در ناقل كلونينگ pTZ57R/T با استفاده از روش كلوني PCR و هضم آنزيمي تاييد شد. ساختارهاي نوكليوتيدي و پيش بيني ساختار پروتييني آنزيم فيتاز با استفاده از آناليز توالي يابي مشخص گرديد. وزن مولكولي آنزيم فيتاز 42 كيلو دالتون تخمين زده شد. نتايج اين مطالعه نشان داد كه به خوبي مي توان نسبت به كلونينگ ژن فيتاز در وكتور كلونينگ اقدام كرد. از طرف ديگر پيش بيني مجازي آنزيم فيتاز با استفاده توالي نوكليوتيدي و اسيد آمينه، پتانسيل توليد آنزيم مقاوم به حرارت را نشان داد.

Phytase has a hydrolysis function on phytic acid which yields inorganic phosphate. Using phytase enzymes in domestic animals have a positive effect on optimal diet intake. Bacillus species can only produce thermostable alkaline phytase. Accordingly extracellular phytase gene was isolated from Bacillus subtilis ATCC 12711 (phyc) using linker primers containing restriction sites of BamHI and HindIII. The isolated fragment was then inserted into pTZ57R/T vector for cloning and nucleotide characterization. Molecular weight of phytase protein was estimated about 42 kDa. On the other hand the model of phytase secondary structure showed the potential of thermostable characterization of enzyme.