تهيه و ارزيابي فيزيكوشيميايي وزيكول غشاي خارجي نيسريا مننژيتيديس سروگروه Aبه عنوان كانديداي واكسن مننگوكوكي

Production and physicochemical evaluation of Neisseria meningitidis serogroup A outer vesicle as a vaccine candidate

سابقه و هدف: واكسن هاي پلي ساكاريدي نيسريا مننژيتيديس سروگروهA به علت ايجاد پاسخ هاي مستقل از لنفوسيت T داراي معايبي هستند. در نتيجه پژوهش هاي زيادي براي جايگزين كردن آنها با اجزاي ديگر باكتري انجام شده است كه مي توان به وزيكول غشاي خارجي ((OMV حاوي PorA اشاره كرد. در پژوهش حاضر، پس از استخراج و ارزيابي بيولوژيكي OMV نيسريامننژيتيديس سروگروهA ،توان القاي سنتز آنتي بادي بر عليه آن در حيوان آزمايشگاهي مورد بررسي قرار گرفت. روش بررسي: استخراج OMV پس از كشت انبوه نيسريامننژيتيديس سروگروه A توسط روش سيادت و همكاران انجام شد. سپس خصوصيات فيزيكو- شيميايي OMVبا استفاده ازميكروسكوپ الكتروني، SDS-PAGE و وسترن بلات ارزيابي شد. مقدار LOS موجود در OMV با استفاده از آزمون LAL و توان OMV درالقاي آنتي بادي اختصاصي با استفاده از الايزا بررسي شد. يافته ها: مقدارپروتيين موجود در OMV، 1/0 ميلي گرم بر كيلوگرم اندازه گيري شد. اندازهOMV 50 تا 150 نانومتر بود و در ارزيابي SDS-PAGE محدوده PorA درناحيه kDa40-35 قرار داشت كه با روش وسترن نيز تاييد شد. مقدار LOS در آزمون LAL در محدوده مجاز مصرف گزارش شد. افزايش عيار معني داري درمقدار IgG پس ازاولين تزريق مشاهده شد. نتيجه گيري: OMV در طي مراحل استخراج، شكل فضايي خود را حفظ نموده و توان القاي عيار بالايي از آنتي بادي هاي اختصاصي بر عليه نيسريا مننژيتيديس سروگروه A را دارد. به همين دليل مي تواند پس از بررسي فازهاي باليني كانديد واكسن مننگوكوكي شود.

Background: Neisseria meningitidis serogroup A Polysaccharides vaccines have been available for many years, but these vaccines have many disadvantages due to their induction of T-Cell independent responses. To overcome these problems, many researches have been focused on other parts of bacterial cell component such as OMV (Outer membrane vesicle). In this study, OMV containing PorA were extracted and evaluated by biological and immunological methods. Materials and methods: OMV were extracted by siadat, et al method. Physicochemical properties of extracted OMV were analyzed by electron microscopy and SDS-page. The toxicity of LPS content in OMV was assayed by LAL test. The Presence of PorA was confirmed by western blot. Antibodies synthesis after immunization by OMV was evaluated using ELISA method. Results: The content of extracted protein was 0.1 mg/ml. Size of OMV was between 50 and 150 nanometer. SDS-PAGE showed that PorA was located in 35-40 kDa. LAL test showed that the endotoxin activity was ranged in 126EU/ml which is safe for using. The ELISA test showed that the total IgG titer was elevated after first injection. Conclusion: The results showed that the conformation of extracted OMV was stable, and there were no progeny determinants in OMV. Also, OMV elicited high level of specific antibodies against Neisseria meningitidis serogroup A. These results indicate that the OMV can be used as a meningococcal vaccine after further investigations.