بررسي اثر داروي آرتميزينين بر پروماستيگوت و آماستيگوت‏هاي ليشمانيا ماژور در شرايط آزمايشگاهي

In Vitro Study of the Effect of Artimisinin on Promastigotes and Amastigotes of Leishmania major

هدف: ليشمانيازيس جلدي يك بيماري عفوني آندميك و از معضلات مهم بهداشتي در بسياري از كشورها از جمله ايران است بنابراين نياز به داروهاي جديد، قابل دسترس و با عوارض كم كاملاً احساس مي‏شود. به همين منظور در پژوهش حاضر تاثير داروي آرتميزينين بر رشد انگل ليشمانيا ماژور و مكانيسم مرگ برنامه‏ريزي شده سلولي ناشي از آن بر پروماستيگوت‏ها و آماستيگوت‏هاي ليشمانيا ماژور در شرايط آزمايشگاهي بررسي شد. مواد و روش‏ها: محلول استوك آرتميزينين به‏صورت تازه با غلظت‏هاي مختلف دارو تهيه شد و IC50 دارو به‏دست آمد. براي به‏دست آوردن اثر سميت سلولي داروي آرتميزينين روي انگل از روش MTT استفاده شد. از غلظت‏هاي مختلف داروي آرتميزينين براي بررسي القاي مرگ برنامه‏ريزي شده سلولي به روش فلوسايتومري روي پروماستيگوت‏هاي ليشمانيا ماژور استفاده شد. نتايج: IC50 داروي آرتميزينين 25 ميكروگرم در ميلي‏ليتر به‏دست آمد. در غلظت 100 ميكروگرم در ميلي‏ليتر بيشترين درصد سلول‏ها (16/68) و در غلظت 10 ميكروگرم در ميلي‏ليتر كمترين درصد سلول‏ها دچار مرگ برنامه‏ريزي شده (78/12) شدند و در گروه كنترل تغييري مشاهده نشد. ميزان سميت دارو روي پروماستيگوت‏هاي ليشمانيا ماژور با افزايش غلظت دارو افزايش يافت. نتيجه‏گيري: در اين بررسي مشخص شد داروي آرتميزينين اثر سميت كمي بر ماكروفاژ دارد. با توجه به نتايج بررسي فلوسايتومتري و روش MTT، مي‏توان داروي آرتميزينين را به‏عنوان يك داروي مناسب ضد ليشمانيايي براي انجام مطالعه در شرايط درون تني پيشنهاد كرد.

Objective: Cutaneous leishmaniasis is an endemic infectious disease considered to be a crucial health problem in many countries, including Iran. As such, there is a need for new medications with few side effects. In the present research we have studied the effect of artimisinin on Leishmania major (L. major) and cell death in vitro. Methods: A specific number of promastigotes of L. major were grown in the presence of different concentration of artimisinin to achieve IC50 of the drug. The MTT method was applied to evaluate the cytotoxic effect of the artiminisinin on L. major. Various densities of this drug were applied to study the induction of apoptosis by flow cytometry on L. major promastigotes. Results: We calculated the IC50 of artimisinin to be 25 ?g/ml by promastigote assay. Promastigotes were incubated at 72 hours incubation with various doses of artimisinin (10, 25, 50 and 100 ?g/ml). The dose 100 ?g/ml showed the most apoptosis (68.16%) by Annexin-V FITC. Whereas the 10 ?g/ml dose had the least apoptosis (12.78%). There was no change in the control group. According to MTT, the toxic effect of artiminisinin on L. major promastigotes increased with increasing drug concentration. Conclusions: This study revealed that artimisinin has a little toxic effect on macrophages. According to the flow cytometry and MTT results, artimisinin can be suggested as an appropriate drug for in vivo antileishmanial study.