بررسي تاثير بيان رونوشت وابسته به نهفتگي ويروس هرپس سيمپلكس تيپ 1 بر مسير TGF-B در سلول‏هاي نوروبلاستوماي انساني

Evaluation of the HSV-1 LAT Transcript Expression Effects on TGF-B Signaling Pathway in Human Neuroblastoma Cells

هدف: ويروس هرپس سيمپلكس تيپ يك پس از آلوده كردن ميزبان به‏صورت طبيعي در گانگليون نورون تريژمينال به‏صورت خفته در مي‏آيد. در اين وضعيت تنها رونوشتي كه از ويروس در سلول قابل تشخيص است رونوشت وابسته به نهفتگي (LAT) است كه اين رونوشت microRNAهايي را توليد مي‏كند كه قادر است مسيرهاي پيام‏رساني در سلول را دستخوش تغيير نمايد. يكي از مسيرهاي كليدي پيام‏رساني سلول مسير فاكتور رشد تومور (TGF-B) است. در اين مسير ژن Smad4 به‏عنوان يك پروتيين مهم رابط بين گيرنده‏هاي غشايي كينازهاي سيتوپلاسمي و فاكتورهاي رونويسي هسته‏اي است. اين تحقيق با بررسي بيان microRNAهاي ويروسي در سلول ميزبان هدف‏گيري ژن Smad4 با اين microRNAها را بررسي نموده است. مواد و روش‏ها: پس از ترانسفكت ژن LAT به داخل سلول‏هاي BE-2(c)، بيان microRNAهاي وابسته به LAT در اين سلول‏ها به كمك واكنش زنجيره‏اي پليمراز كمّي (Real-Time PCR) ارزيابي شد و به كمك روش‏هاي مبتني بر بيوانفورماتيك امكان هدف‏گيري ژن Smad4 با اين microRNAها نيز بررسي و در ادامه بيان ژن Smad4 و ژن‏هاي پايين‏دست آن به كمك واكنش زنجيره‏اي پليمراز كمّي مطالعه شد. نتايج: شواهد و نتايج نشان مي‏دهد كه رونوشت LAT در سلول ميزبان توليد microRNAهايي مي‏كند كه تجزيه و تحليل‏هاي بيوانفورماتيكي دو الگوريتم متفاوت گواهي بر هدف‏گيري ژن Smad4 توسط اين microRNAها مي‏دهد اين در حالي است كه نتايج واكنش زنجيره‏اي پليمراز كمّي نيز تاييدي بر اين ادعاست. نتيجه‏گيري: نتايج مبتني بر تجزيه و تحليل‏هاي بيوانفورماتيك و بررسي بيان رونوشت Smad4 و پروتيين‏هاي پايين‏دستش همانند CyclinD، CDK2 و Myc نشان دهنده كنترل بيان اين ژن توسط microRNAهاي ويروس هرپس سيمپلكس تيپ يك است.

Objective: Infection with herpes simplex virus type 1 induces viral latency in neuron trigeminal ganglions. The late associated transcript (LAT) is uniquely expressed in infected neural cells, however no coding protein associated with these transcripts has been identified in infected cells. It has been shown that six microRNAs transcribed from LAT have the capabilities to affect the cell signaling pathways, thus interfering in pathways such as those of cell differentiation and proliferation. Transforming growth factor beta (TGF-B) pathway is a critical pathway among cell signaling circuits. The Smad4 protein, as an important member of the TGF-B signaling pathway, mediates the connection between membrane receptors, cytoplasmic kinases, and nuclear transcription factors. Methods: This study bioinformatically and experimentally evaluated LAT microRNA expression and assessed microRNA targeting of Smad4 transcripts in human neuroblastoma cells by using real-time PCR. Results: Analysis of two different softwares results showed that the Smad4 gene was targeted by LAT-derived microRNAs at multiple sites. Over-expression of LAT microRNAs in BE2(c) cells caused reduction in Smad4 transcripts. Conclusion: The results of bioinformatical analysis with relative quantification of Smad4 transcripts and its downstream-related genes such as cyclinD, CDK2, and Myc showed that the LAT transcript could control Smad4 expression.