همسانه سازي هدف دار ژن GFP به عنوان رهياب و فيوژن آن با واسطه لينكر انعطاف پذير PRARR به ژن هاي واكسن كايمريك CTB-STB

Targeted Cloning of GFP as a Tracker and Its Fusion Mediated by PRARR Flexible Linkers to CTB-STB Chimerical Vaccine Gene.

مقدمه و هدف: ژن‌هاي گزارشگر وسيله‌اي مناسب براي مطالعه بيان ساير ژن‌ها هستند. GFP به عنوان يك گزارشگر، پروتييني است كه زير تابش فرابنفش از خود نور سبز روشن گسيل مي كند. هدف از اين تحقيق اتصال ژنگزارشگر gfp به ژن هاي انتقال دهنده و ادجوانت ctxB و stxB مي باشد. لينكر مورد استفاده مابين ژن هاي متصل شده، توالي نوكليوتيدي براي ساخت توالي آمينواسيدي PRARR(pro- arg-ala-arg-arg) مي باشد. كاست ژني ساخته شده مي تواند واكسن موثري بر عليه دو بيماري شيگلوز و وبا باشد. مواد و روش بررسي: پرايمرهاي مورد نياز براي ژن هاي gfp،ctxB و stxB، طراحي و تهيه شد. با استفاده از تكنيك PCR براي تكثير ژن ها اقدام شد. ژن هاي تكثير شده در وكتور pGEM-T easy vector همسانه سازي و پس از تاييد قطعات ژني به يكديگر اتصال يافتند. به اين منظور در پرايمرهاي ژن gfp دو لينكر انعطاف پذير طراحي و قرار داده شد. نتايج: ژن هاي تكثير شده در وكتور pGEM-T easy vector همسانه سازي شدند و با استفاده از روش PCR ، PCR داخلي، برش آنزيمي و دستگاه توالي ياب مورد تاييد قرار گرفتند. قطعات ژني تاييد شده به ترتيب ctxB –gfp-stxB به يكديگر اتصال يافتند. بحث: كاست ژني ctxB-gfp-stxB حامل ژن گزارشگر gfp مي باشد. بنابراين زير همسانه سازي آن در وكتور ميزبان هاي مختلف و بيان آنها امكان رهگيري عملكردي ژن ها در شرايط آزمايشگاهي و طبيعي را به وجود خواهد آورد.

Introduction and aim: Reporter genes are suitable tools for studying the expression of other genes. GFP, as a reporter, is a protein which emanate green light upon UV exposure. The purpose of this study is connection of the gfp gene with, ctxB and stxB, gene deliverings and adjuvants. The linker used between of connected genes is nucleotide sequences encoding for PRARR (pro- arg-ala-arg-arg) oligopeptide. The protein expressed of made fusion can be used as an effective vaccine against for Shigellosis and Cholera. Materials and Methods: The primers required for gfp, ctxB and stxB genes were designed and were prepared. genes were amplified using PCR technique. Amplified genes were cloned in the pGEM-T easy vector and they were fused together after confirmation of gene fragments. For this end, two flexible linkers were designed and were placed in the primers of gfp gene. Results: Amplified genes were cloned in the pGEM-T easy vector, and were confirmed using PCR, Nested PCR, restriction enzymes and sequence analyzing system. Approved gene fragments, as such ctxB-gfp-stxB, mixed together. conclusion: Gene cassette, ctxB-gfp-stxB, carries the gfp reporter gene. Ergo it’s sub-cloning in different host’s vectors and their expression will lead to the possibility of developing in vitro and in vivo functional tracking systems.