روشي اصلاح شده براي استخراج DNA از خون كامل حيوانات اهلي براي آزمايش‌هاي PCR

Modified method to extract DNA from mammalian whole blood for PCR-based methods

استخراج DNA يكي از اولين و مهم‌ترين مراحل در آزمايشات بيولوژي ملكولي است. كيفيت و خلوص بالاي DNA استخراج شده و سادگي مراحل انجام كار، به همراه پايين بودن هزينه انجام كار از جمله نكات مورد توجه متخصصين بيولوژي است. DNA ژنوميك پستانداران، ملكولي بسيار طويل مي‌باشد. بنابراين مراحل انجام كار بايد به گونه اي باشد تا حداقل تكان و سانتريفوژ در آن لحاظ گردد. در اين تحقيق روشي اصلاح شده براي استخراج DNA آزمايش گرديد كه داراي مزيت‌هايي مثل سادگي، ارزان بودن، عدم استفاده از مواد سمي و خطرناك، عدم نياز به تجهيزات پيشرفته، استفاده از حداقل امكانات و مواد شيميايي و آنزيم، مراحل كم استخراج و استحصال مقدار كافي DNA است. متوسط ميزان DNA حاصل از اين روش ng/µl52±58/358 مي‌باشد. ميزان دانسيته نوري 25/76% از نمونه ها (61 از 80) 2-8/1، 5/12% (10 از 80) كمتر از 8/1 و 25/11% (9 از 80) دانسيته اي بيشتر از 2 داشتند. نتايج آزمايشات PCR، PCR-RFLP، ARMS-PCR و SSCP نشان مي‌دهد كه DNA حاصله از اين روش براي انجام آزمايشات PCR مناسب است.

DNA extraction from cells is the first and the foremost step involved in molecular biology. The high quality and purity of extracted DNA, and simplicity as well as low cost of the extraction method are important considerations for a molecular biologist. Genomic mammalian DNA is very long and extraction must avoid high levels of centrifuge and severe shakes. This modified method that carried out from leukocytes is simple, low cost and does is not requires neither hazardous chemicals nor special devices and does not involve numerous enzymes or multiple steps, which increases the possibility of contamination and DNA degeneration. The mean rate of DNA has been 358.58±52 ng/µl. the rate of OD 76.25% of samples (61 of 80) was 1.8-2, 12.5% (10 of 80) was less than 1.8 and 11.25% (9 of 80) was more then 2. The results of PCR, PCR-RFLP, ARMS-PCR and SSCP showed that produced DNA of this method is suitable for PCR tests.