بررسي حذف هاي كوچك كروموزوم Y در مردان نابارور مراجعه كننده به بيمارستان فاطميه همدان با روش Multiplex PCR

Y Chromosome Microdeletion Study in Idiopathic Infertile Men in Hamadan Fatemieh Hospital with Multiplex PCR Method

مقدمه و هدف : بر طبق گزارشهاي سازمان بهداشت جهاني، عامل اصلي ناباروري در 20% موارد بين زوجهاي فاقد فرزند قطعاٌ توسط عامل مذكر ايجاد مي گردد. 70% موارد ناباروري مردان علل شناخته شده اي دارد، اما در 30% موارد علت ناشناخته است. كروموزوم Y و حذفهاي كوچك بازوي بلندكروموزوم Y در سه ناحيه AZFa ، AZFb ، AZFc مرتبط با نقص روند اسپرماتوژنز مي باشد. اهميت اين حذفهاي ژني در احتمال انتقال آن به نسل بعد با روشهاي كمك باروري است. در اين مطالعه هدف بررسي حذف هاي كوچك كروموزوم Y در مردان نابارور آزواسپرم و اليگواسپرم شديد مراجعه كننده به مركز IVF بيمارستان فاطميه همدان مي باشد. روش كار: در اين مطالعه مورد شاهدي 56 مرد نابارور با اليگواسپرمي و آزواسپرمي غير انسدادي كه فاقد هرگونه اختلال سيتوژنتيكي بودند و 44 مرد سالم بارور مورد بررسي قرار گرفتند. كليه بيماران جهت تعيين حذفهاي كروموزوم Y در سه ناحيهAZFa ، AZFbو AZFc با روش Multiplex PCR مورد بررسي قرار گرفتند.پرايمرهاي sY84,sY86براي ناحيه AZFa ، پرايمرهاي sY127,sY134 براي ناحيه AZFb و پرايمرهايsY254,sY255 براي ناحيه AZFc استفاده گرديد. نتايج: ميزان جهش در مردان اليگو و آزواسپرم 87/1% به دست آمد كه با تفكيك به گروههاي آزواسپرم و اليگواسپرم شديد به ترتيب مقادير 4% و 0% به دست آمد. يك بيمار از 56 بيمارداراي حذف در ناحيه(AZF) بود، كه 1 حذف در ناحيهAZFa(sY84) ، 2 حذف در ناحيه Sy134) و AZFb (sY127 و 1 حذف در ناحيه AZFc (Sy254) مشاهده گرديد. در هيچ يك از مردان گروه كنترل در نواحي مورد بررسي جهش مشاهده نگرديد. نتيجه نهايي: اين مطالعه تاكيد ميكند كه آناليز و بررسي حذفهاي كوچك كروموزوم بايستي براي كليه بيماران اليگو وآزواسپرم با علت ناشناخته كه كانديد تزريق درون سيتوپلاسمي اسپرم هستند انجام گيرد. نتايج حاصل همچنين تاكيد مي كند كه عوامل شناخته نشده اي در ناباروري مردان وجود دارند كه لزوم بررسي هاي وسيع تر در اين زمينه را ايجاب مي كند.

Introduction & Objective: Male factor is the major cause of infertility in 20% of cases (WHO). There are known etiologies for 70% of cases .However, 30% of infertility cases are of idio-pathic origin. The Y chromosome and micro deletion of the long arm of the Y chromosome (Yq) in three regions (AZFa, AZFb ,AZFc ) are associated with spermatogenic failure and is a major etiology for oligo and azoospermia in infertile men. With the advent of assisted re-productive technology and intracytoplasmic sperm injection, knowledge about the various factors leading to spermatogenic impairment is one of the most important aspects of scien-tific research. Therefore, this study was designed to identify the frequency of microdeletions of Yq in azoospermia and oligozoospermia males refered to Hamadan Fatemieh hospital. Materials & Methods: 56 infertile males with non obstructive oligozoospermia and azoosper-mia and without any cytogenetic abnormality and 44 fertile men with normal cytogenetic were included in this case-control study. Semen analysis was done is each case to determine the spermatogenic statuse. Patients with normal karyotyping were analyzed for determination of microdeleton in Y chromosome in the AZFa, AZFb and AZFC regions with multiplex PCR method. The sequence tagged sites (STS) primers sY84, sY86 (AZFa); sY127, sY134 (AZFb); sY254, sY255 (AZFc) were used for each case. Results: In this study the rate of mutation were 1.87% in oligo and azoospermia infertile men, 4% in azoosperm and 0% in oligospermia patients. Of 56 cases, 1 case showed deletion in AZF region ,1 deletion was in AZFa(sY84), 2 deletions in AZFb (sY127, sY134), and 1 dele-tion in AZFc (sY254). That had 1 deletion in AZF a (sY84), 2 deletions in AZFb (sY134, sY127) , and 1 deletion in AZFc(sY254). No microdeletions were seen in the SRY gene and no microdeletions were found in men in the control group. Conclusion : Our results emphasize that Y chromosome microdeletion analysis should be car-ried out in all patients with idiopathic azoospermia or severe oligospermia who are candi-dates for intracytoplasmic sperm injection. Moreover, it is highly suggested to perform fur-ther studies to discover the numerous etiologies of idiopathic male infertility. (Sci J Hamadan Univ Med Sci 2013; 19 (4):48-56)