مقايسه چهار روش مشاهده مستقيم، الايزا، كشت و Nested PCR در بررسي آلودگي شير مخزن دامداري‏ها به باكتري مايكوباكتريوم آويوم تحت گونه پاراتوبركولوزيس

Comarison of direct microscopic examination, Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA), culture and Nested-PCR for diagnosis of herds bulk tank milk infection with Mycobacterium avium subspecies parat

عامل بيماري يون، باكتري مايكوباكتريوم آويوم تحت گونه پاراتوبركولوزيس است و هر ساله زيان فراواني در سطح جهاني، از قبيل كاهش توليد، افت شاخص هاي توليد مثلي و حذف دام مبتلا را متوجه صنعت گاو شيري، مي‏نمايد. از ديگر سوي، اين باكتري را يك پاتوژن زيونوز مي دانند و تحقيقات جديد احتمال مي دهند كه اين باكتري در ايجاد بيماري كرون در انسان، نقش داشته باشد. هدف اين مطالعه مقايسه روش‏هاي تشخيص آزمايشگاهي الايزا، مشاهده مستقيم، كشت و Nested-PCR در شير بالك تانك جهت تشخيص آلودگي شير مخزن گله‏ها به باكتري مايكوباكتريوم آويوم زيرگونه پاراتوبركولوزيس، مي‏باشد. بدين منظور نمونه گيري از مخزن 100 دامداري صنعتي استان تهران صورت پذيرفت و اين نمونه‏ها با هر چهار روش كشت شير، مشاهده مستقيم، Nested-PCR و الايزا مورد بررسي قرار گرفتند كه تعداد 82 نمونه (82%) در محيط كشت مثبت بوده‏اند، 94 نمونه (94%) در تستIS900 Nested PCR مثبت بوده‏اند و 98 نمونه (98%) با الايزا مثبت بوده‏اند. اما از كل نمونه‏هاي تست شده تنها 33 نمونه (33%) در مشاهده مستقيم مثبت بودند. تعداد چهار نمونه وجود داشت كه در تست الايزا مثبت بودند ولي در تست PCR منفي شدند. اين چهار نمونه به علاوه 12 نمونه ديگر كه الايزاي آنها مثبت بود، در مجموع 16 نمونه در محيط كشت، رشد باكتري نداشتند. در مجموع نتايج اين مطالعه ارجحيّت Nested PCR بر ساير روش‏هاي استفاده شده در اين تحقيق را، تاييد مي‏نمايد. در ضمن نتايج اين مطالعه نشان دهنده ميزان بالاي آلودگي به اين باكتري در دامداري هاي استان تهران مي‏باشد كه نيازمند اقدامات جدي تري است.

Causative agent of Johne’s diseases is Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (MAP) and each year, it hurts dairy cattle industry worldwide by depression of production and reproductive indexes and culling of affected animals. This bacteria is known as a zoonotic pathogen and recent researches explain its probable role in Crohn’s disease in humans. This study compared four laboratory diagnostic tests; including Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA), direct microscopic examination, milk culture and Nested-PCR for diagnosis of herds bulk tank milk infection with MAP bacteria. 100 bulk tank milk samples were obtained from 100 industrial dairy herds of Tehran province. Samples were screened by four tests and 82 samples (82%) detected as positive in culture media, 94 milk samples (94%) were positive by Nested-PCR test and 98 samples were positive in ELISA test results (98%). But direct microscopic examination identified just 33 milk samples as positive. Four positive samples of ELISA test were detected as negative samples by Nested-PCR. These 4 samples in addition to 12 other samples which diagnosed as positive by ELISA, had no growth in culture media (16 samples). These results indicated superiority of Nested-PCR among these four tests for diagnosis of bulk tank milk infection with MAP bacteria. Furthermore, the results represent high prevalence of MAP bacteria in bulk tank milk of dairy herds in Tehran province and it needs more serious eradication efforts.