معرفي روش سريع و ساده‌ي استخراج دي ان اي در گل گاو زبان ايراني(Echium amoenum Fisch&Mey.)

Introducing a new method of genomic DNA extractionin Dicotyledonous medical plants

چكيده در كل براي تهيه‌ي بافر استخراج دي ان اي از مواد مختلفي استفاده مي‌گردد. برخي از اين مواد حساس به دما بوده و برخي نيز همانند فنول-كلرفرم از نظر سلامتي براي انسان خطرناك مي‌باشند. علاوه بر اين نيازمند استــفاده از نيــتروژن مايـع و آنزيـــم آر ان آز (RNase) هستند. با استفاده از بافر STE، بسياري از مواد ياد شده حذف مي‌گردد. همچنين در روش‌هاي قبلي به دليل نياز داشتن به موادي همچون BSA كه علاوه بر داشتن هزينه‌ي بالا و حساسيت به ازدياد دما درحين عمل استخراج، نيازمند استفاده از دستگاه سانتريفيوژ با قابليت سيستم خنك‌كننده را امري اجتناب‌ناپذير مي‌نمايد كه بسياري از آزمايشگاه‌ها فاقد اين امكانات هستند، از سوي ديگر روش‌هاي معمول نيازمند بكارگيري محلول‌ها در حجم بالا مي‌باشند كه روي هم رفته هزينه استخراج دي ان اي را افزايش مي‌دهند به همين دليل استفاده از روش‌هاي معمول براي استخراج DNA در گل گاو زبان ايراني مقرون به صرفه نبود. در روش بهينه شده و پيشنهادي، طي آزمايشات مختلف از PVP به جاي BSA استفاده گرديد اين ماده ضمن داشتن مقاومت بالا در برابر افزايش دما، باعث حذف متابوليت‌هاي ثانويه بخصوص پلي‌فنل‌ها از محتويات سلولي بافت گياهان مي‌گردد با بكارگيري اين ماده زمان شستشوي عصاره‌ي سلولي با محلول تركيبي كلروفرم- ايزوآميل الكل به يك مرحله كاهش مي‌يابد. مجموعه‌ي عوامل فوق باعث مي‌شوند كه اين روش نسبت به روش‌هاي معمول استخراج DNA در مدت زمان كم‌تري قابل انجام باشد. همچنين با كاهش مواد مصرفي به ميزان يك چهارم نسبت به روش‌هاي قبلي، روش STE به عنوان يك روش ساده، سريع و ارزان براي استخراج DNA ژنومي در گل گاو زبان ايراني بهينه گرديد كه مي‌توان اين روش را در طيف وسيعي از گياهان دارويي نيز بكار گرفت

Abstract To provide DNA extraction buffer, various materials are used. Some of these materials are sensitive to temperature and others such as phenol-chloroform is dangerous for human health. Moreover, they needed liquid nitrogen and Rnase enzymes, many of the mentioned substances will be removed by using STE buffer. In previous methods, the researchers nedded substances such as BSA, which had high cost and sensivity to increasing of temperature while extraction process made it inevitable to use centrifuge device with cooler system. But most laboratories do not have these facilities. On the other hand, common methods need to employ solutions in high volumes, which altogether increase the cost of DNA extraction. For this reason, using common methods to extract DNA was not economical in the laboratories with fewer facilities. In optimized and proposed method, PVP was used instead of BSA in different experiments. in addition to having high resistance against temperature increasing, it removed secondary metabolites, specially poly phenols from cellular extracts of plant tissues, it also used this substance to reduce cell extract washing time with, component solutions of chloroform- isoamil alcohol to one stage. All the above mentioned factors cause this method to be applicable in a shorter time than common methods of DNA extracting. It also long with decreasing the component to less than a quarter of previous methods, the STE method was optimized as a simple, fast and cheap method to extract genomic DNA in a wide range of medicinal plants.