تنوع ژنتيكي جدايه‌هاي فيتوپلاسماي همراه با بيماري جاروك بادام دراستان‌هاي فارس‌، كرمان و كردستان‌

GENETIC DIVERSITY OF THE PHYTOPLASMA ISOLATES ASSOCIATED WITH ALMOND WITCHESʹʹ BROOM IN IRAN

بيماري جاروك بادام كه فيتوپلاسماي همراه با آن Candidatus Phytoplasma phoenicium نام دارد در حال حاضر يكي از مخرب‌ترين بيماري‌هاي بادام در ايران و لبنان است. تنوع ژنتيكي در فيتوپلاسماي همراه با جاروك بادام در نمونه‌هاي تهيه شده در دو نقطه از باغ‌هاي اطراف نيريز (جدايه‌هاي نيريز1ونيريز2)، يك نقطه از مشكان نيريز(جدايه مشكان)، دو نقطه در اطراف كرمان (جدايه‌هاي كرمان1وكرمان2) ويك نقطه در شهرستان سنندج (جدايه سنندج) بررسي گرديد. نهال‌هاي بادام تلخ مايه‌زني شده با جدايه‌هاي عامل جاروك بادام در شرايط كنترل شده واكنش‌هاي متفاوتي را نشان دادند. RFLP محصول PCR مستقيم با جفت آغازگرP1/P7 (تقريباً 1800 جفت باز از اپرون ار.ان.اي ريبوزومي) با آنزيم‌هاي, CfoI, HaeIII, HinfI, HpaII, RsaI, TaqI AluI نشان داد كه جدايه مشكان از نظر نقوس حاصل از برش با انزيم CfoI و جدايه كرمان 2 از نظر نقوش حاصل از برش با آنزيم HinfIبا بقيه متفاوت‌اند و بر اين اساس جدايه‌هاي مورد مطالعه در 3 گروه قرار مي‌گيرند. جدايه مشكان در گروه يك، جدايه كرمان2 در گروه دو و جدايه‌هاي كرمان ا، سنندج، ني‌ريز 1 و ني ريز 2 در گروه سه قرار گرفتند. مقايسه ميزان تشابه نوكليوتيدي در ناحيه SRنيز تفاوت جدايه‌هاي عامل جاروك بادام را تاييد كرد و نشان داد كه جدايه مشكان با ديگر جدايه‌هاي مورد مطالعه تفاوت قابل ملاحظه‌اي دارد. بررسي تبارزايي براساس ترادف اپرون آر ان اي ريبوزومي، جدايه‌هاي عامل جاروك بادام را در گروه جاروك نخود كبوتر (16S rIX, Pigeon pea witchesʹ broom) قرار داد و نشان داد كه اين جدايه‌ها يكسان نيستند. تمامي بررسي‌هاي مولكولي تفاوت جدايه خفر با جدايه‌هاي مورد مطالعه در اين تحقيق را تاييد كرد. بررسي‌هاي RFLP، مقايسه ميزان تشابه نوكليوتيدي و تبارزايي نشان داد كه تفاوت ژنتيكي جدايه‌هاي جاروك بادام مربوط به 600 جفت باز از اپرون ار ان اي ريبوزومي شامل انتهاي? 5 ژن 16S، ناحيهSR و ابتداي? 3 ژن 23S است.

Almond witchesʹ broom (AWB) is an economically important disease associated with Candidatus Phytoplasma phoenicium, a phytoplasma belonging to the pigeon pea witchesʹ broom group (16SrIX). Induction of different symptoms under natural conditions and after graft inoculation of bitter almond seedlings suggests genetic diversity of Keman 1, Kerman 2, Moshkan, Neyreez 1, Neyreez 2 and Sanandaj isolates of AWB in Iran. Restriction fragment length polymorphism, percent sequence homology and phylogenetic analysis were used for further assessment of genetic diversity among these isolates. RFLP analysis of P1/P7 PCR products (1.8 kbp) using AluI,haeIII, HhaI, HinfI, HpaII, Msel, TaqI and TasI revealed that Moshkan and Kerman 2 isolates are distinguishable from other isolates because of the different dijestion patterns produced by Cfo1 1 and Hinf1 enzymes, respectively. On this basis Moshkan isolate fell into group 1, Moshkan isolate into group 2 and Kerman1, Neyreez1, Neyreez2 and Sanandaj isolates into group 3. Percent homology of SR sequences differentiated AWB isolates. Moshkan isolate being distinctly different from the othes. Phylogenetic tree constructed with 16S rRNA gene and SR sequences also indicated genetic diversity of AWB isolates.Results of the present study shows that the 600 base pairs of rRNA gene operon following 1200 bp of the 5ʹ start end of rRNA operon is the preffered fragment for studing genetic diversity of AWB phytoplasma. In the present stuy AWB disease is reported for the first time from Kerman and Sanandaj almond growing areas of Iran.