بررسي و بهينه سازي برخي عوامل موثر بر انتقال ژن بتا-گلوكورونيداز (gusA) با واسطه آگروباكتريوم در سيب پاكوتاه (Malus domestica.Borkh var.Gami Almasi)

Optimizing Factors Affecting Agrobacterium Tumefaciens Mediated Transformation Of Dwarf Rootstock Of Apple (Malus Domestica Borkh Cv Gami Almasi)

سيب گمي الماسي يكي از ارقام پاكوتاه سيب است كه منشا آن شمال غرب ايران بوده و به لحاظ ويژگي‌هاي مناسب از نظر باغباني حايز اهميت مي باشد. انتقال ژن با استفاده از آگروباكتريوم يكي از روش هاي تراريختي است كه تاكنون در مورد بسياري از گونه‌ها و ارقام انجام گرفته است. بهينه‌سازي عوامل مختلف تاثير گذار در تراريختي و باززايي گياهان تراريخت لازمه برنامه‌هاي انتقال ژن محسوب مي‌شود. در اين پژوهش با استفاده از انتقال ژن بتا گلوكورونيداز برخي از عوامل موثر در تراريختي سيب گمي براي اولين بار در ايران مورد بررسي قرار گرفت. سويه آگروباكتريوم، غلظت باكتري، مدت زمان تلقيح، طول مدت كشت همزمان و نوع محيط القاي بيماري‌زايي باكتري و تاثير آن ها در ميزان تراريختي، از عوامل مورد بررسي بودند. در آزمايش هاي تراريختي غلظت موثر كانامايسين براي انتخاب تراريخت‌ها 50 ميلي‌گرم در ليتر به دست آمد و از بين تيمار‌هاي مختلف سويه‌ GV3850 نسبت به GV3101 موثرتر بود. بر اساس نتايج دو روز كشت همزمان و استفاده از محيط LB به عنوان محيط آلودگي آگروباكتريومي نسبت به AB مناسب‌تر تشخيص داده شد. درصد تراريختي در بهترين تيمار 2 درصد بود.

Gami Almasi is a dwarf rootstock of apple (Malus domestica Bork) that originated from North West of Iran and has some good horticultural characteristics. Agrobacterium mediated gene transformation is a method that perform for introducing of gene into plant species and need for developed to new varieties. Present study performed for first time in this cultivar. Optimizing of factors that affected on transformation is necessary in transformation programs. In this research some factors that affected on transformation such as, Agrobacterium strain, bacteria suspension ‍‍concentration, infection time, Co-cultivation period and Agrobacterium infection medium type, were evaluated byinsertion of b-glucoronidase gene. In transformation experiments, infection by bacterial suspension in 0.5 OD at 600 wavelengths for 5 minutes, showed better results than other treatments. All regenerated shoots on selective medium tested by histochemical GUS assay and PCR. Agrobacterium tumefaciens strain GV3850, with 2 days co-cultivation period were better than GV3101 strain with 3 days, co-cultivation for transformation performance. LB medium had better effect than AB medium as Agrobacterium infection medium. Under the most suitable condition, 2% transformation ratio was observed.