طراحي و راه اندازي آزمون الايزا غير مستقيم به منظور تشخيص عفونت ويروس اپشتن-بار بر اساس آنتي ژن gp125 كپسيد ويروس

Development and evaluation of indirect enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) to detect Epstein-Barr virus infection based on gp125 viral capsid antigen

زمينه و هدف: ويروس اپشتن-بار از خانواده هرپس ويروس ها، بوسيله تماس مستقيم با ترشحات عفوني منتقل مي شود. در طي عفونت، آنتي بادي هايي از كلاس IgG و IgM عليه آنتي ژن كپسيد ويروسي توليد مي شوند كه در تعيين وضعيت عفونت نقش دارند. هدف از اين مطالعه طراحي و راه اندازي آزمون الايزا براي تشخيص آنتي بادي هاي IgG و IgM عليه آنتي ژن كپسيد ويروس اپشتن-بار بود. روش بررسي: در اين مطالعه تحقيقي-توليدي، آزمون الايزا با استفاده از آنتي ژن كپسيد ويروسي (gp125) بمنظور تشخيص آنتي بادي هاي IgG و IgM اختصاصي ويروس اپشتن-بار طراحي و راه اندازي شد. سپس 101 نمونه سرمي با آزمون الايزا IgM (26نمونه مثبت و 75 نمونه منفي) و 105 نمونه سرمي با آزمون الايزا IgG (98 نمونه مثبت و 7 نمونه منفي) طراحي شده مورد آزمايش قرار گرفتند و جهت بررسي ويژگي، 24 نمونه سرمي بيماران غير منونوكليوز عفوني استفاده گرديد. نتايج حاصل با آزمون ايمنوفلورسنس (IFA) و كيت تجاري الايزا اكويي پار-ايتاليا (Equipar Diagnostics -Italy) مقايسه شد. به منظور تجزيه و تحليل داده ها از نرم افزار SPSS و آزمون مك نمار استفاده گرديد. يافته ها: حساسيت نسبي، ويژگي نسبي و ميزان همخواني آزمون الايزا IgM و آزمون الايزا IgG طراحي شده در مقايسه با كيت تجاري به ترتيب برابر 3/92%، 96% و 95% - 6/96%، 9/88% و 95% بود. آزمون الايزا طراحي شدهIgG زماني كه با آزمون IFA مقايسه گرديد. به ترتيب داراي حساسيت، ويژگي و ميزان همخواني 97%، 100% و 1/97% و ارزش اخباري مثبت 100% بود. نتيجه گيري: ماهيت آنتي ژن پوشش داده شده نقش مهمي در افزايش حساسيت و ويژگي دارد به عبارتي زماني كه در آزمون الايزا از آنتي ژن اصلي استفاده گردد آزمون ويژگي بالايي دارد (الايزا طراحي شده) اما زماني كه از آنتي ژن سنتتيك (كيت تجاري اكويي پار-ايتاليا) استفاده گردد حساسيت آزمون بالا مي رود لذا پيشنهاد مي شود بمنظور افزايش حساسيت و ويژگي آزمون مخلوطي از هر دو آنتي ژن در طراحي الايزا مورد استفاده قرار گيرد.

Background and aims: Epstein-Barr virus is a member of the herpesviridae family which is spreaded by direct contact with infectious secretion. Serum IgM and IgG are antibodies to the Viral Capsid Antigen (VCA) which appear during infection and Involve in determining the infection status. The aim of this study is to design and evaluate Epstein Barr Virus (EBV) IgM and IgG indirect ELISA using gp125 Viral Capsid antigen for diagnosis of EBV infection. Methods: In this study, ELISA test using Viral Capsid Antigen (gp125) for detection of EBV-specific IgG and IgM antibodies was designed and launched. To evaluate our home-made ELISA, 101 human sera (26 positive sera and 75 negative sera) were tested with VCA IgM ELISA and 105 human sera (98 positive sera and 7 negative sera) were tested with VCA IgG ELISA. To determine the specificity, 24 serum samples from patients without mononucleosis infection were used. The samples were simultaneously evaluated for VCA IgG and VCA IgM by commercial ELISA kit and with the indirect IF test. Data were analyzed using SPSS software version 15 and McNemar test. Results: Our results displayed the relative sensitivity, relative specificity and agreement of 92%, 96% and 95% respectively for the VCA IgM ELISA and the relative sensitivity, relative specificity and agreement of 96.6%, 88.9% and 95% respectively for the VCA IgG ELISA when compared with commercial ELISA kit. VCA IgG ELISA showed 97% sensitivity, 100% specificity and 97.1% agreement when compared with indirect IF and the 100% positive declarative value. Conclusion: Nature of the coated antigen has an important role in increasing the sensitivity and specificity. In other words, when the native antigen (Our home-made ELISA) is used in the ELISA test, the test has a high specificity but when the synthetic antigen (ELISA kits from Equipar Diagnostics -Italy) is used the sensitivity will go up, so increasing the sensitivity and specificity of the test it is recommended to use, both antigens in the ELISA design.