بررسي و مقايسه محتوي پروتييني پروماستيگوت وآماستيگوت ليشمانيا ماژور تهيه شده در محيط كشت با استفاده از روش الكتروفورز ژل پلي اكريلاميد

Investigation and Comparison of Leishmania major Promastigote and Amastigote Protein Content by Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis

مقدمه و هدف: ليشمانيا تك ياخته اي ازخانواده تريپانوزوماتيده ازرده ساركوماستيگوفورا مي باشدكه داراي دو مرحله ي قابل تشخيص در چرخه ي زندگي خود است. فرم پروماستيگوت، فلاژل دار و متحرك بوده و در روده پشه خاكي ناقل تكثير مي يابد. فرم آماستيگوت، غير متحرك بوده و در داخل ماكروفاژهاي ميزبان پستاندار مستقر مي گردد. يكي از راه هاي مبارزه موثر با يك ميكروارگانيسم ، شناسايي آنتي ژن هاي هدف اختصاصي آن مي باشد. همچنين توليد واكسن هاي كارآمد متضمن تعيين هويت و توليد و تخليص ايمونوژن هاي مصونيت بخش است . هدف از انجام اين مطالعه ، يافتن محتوي پروتييني آماستيگوت و پروماستيگوت، شناسايي پروتيين هاي هر مرحله از انگل ، مقايسه اين يافته ها و دستيابي به تفاوت ها و شباهت هاي آنها با يكديگر بوده است. روش كار: اين مطالعه يك مطالعه مقطعي بوده و براي نيل به اهداف از پيش تعيين شده ، نمونه L.major (MRHO/IR/75/ER) از موش هاي Balb/c از قبل آلوده شده به محيط كشت NNN اصلاح شده و سپس به محيط مايع كشت سلولي RPMI-1640 انتقال داده شد. براي تهيه اشكال آماستيگوت از محيطRPMI-1640 با PH 5/5 در دماي c° 37 و حضور 5% Co2 استفاده شد. الكتروفورز به روش سديم دودسيل سولفات (SDS-PAGE) انجام گرديد و اوزان ملكولي باندهاي حاصل از دو آنتي ژن مقايسه گرديد. نتايج: باندهاي مشترك ميان هر دو فرم، باندهاي با وزن ملكولي130تا110، 96، 94، 90، 80، 65، 63، 50، 36و 19كيلو دالتون بودند. باندهاي مختص پروماستيگوت، باندهاي با وزن ملكولي 22،28،46كيلودالتون بود. همچنين باندهاي 12 و 35 كيلودالتوني فقط در فرم آماستيگوت ديده شد. نتيجه نهايي: با توجه به نتايج مطالعه حاضر انگل ليشمانيا در مراحل پروماستيگوت و آماستيگوت واجد پروتيين هاي اختصاصي همان مرحله است . طبق تحقيقات انجام شده آماستيگوت هاي اكسنيك و بافتي مشابه هستند در نتيجه با تكيه بر آنتي ژن هاي اختصاصي هر مرحله ، مي توان در جهت طراحي و تهيه واكسن و داروهاي موثر برضد انگل گام برداشت .

Introduction & Objective: Leishmania is a protozoan of the trypanosomatidae family. This pro-tozoan has two stages in its life cycle, promastigote form in sand flies and amastigote form in macrophage of mammalian hosts. The purpose of this study was identification and compari-son of proteins of Leishmania amastigote and promastigote stages. Materials & Methods: The present study is a cross sectional study of two forms of Leishmania major. To culture promastigotes , L.major (MRHO/IR/75/ER) from previously infected Balb/c mice was transferred to modified N.N.N medium with overlay of liquid BHI and then transferred to RPMI-1640 at 26oc ± 1 for mass production. After isolation and growth, pro-mastigotes were transferred to liquid cell culture medium RPMI-1640 with pH 5.5 and incu-bated at 5% CO2 at 37oc for 72 hours until promastigote to amastigote transformation. Elec-trophoresis was performed with SDS-PAGE method to find and compare the molecular weight of the antigens of two stages. Results: The molecular weights of the bands observed in both forms were as follows: 19, 36, 50, 63, 65, 80, 90, 94, 96, 110- 130 KDa. The proteins in the surface of only promastigote were 22, 28 and 46 KDa and special proteins in the surface of amastigote were 12 and 32 KDa. Conclusion : According to this study Leishmania parasite has stage specific proteins. Various studies have shown that axenic amastigotes and tissue amastigotes are similar in their protein content. Therefore, based on stage specific proteins ,effective drugs and vaccines can be de-signed against leishmaniasis. (Sci J Hamadan Univ Med Sci 2013; 20 (1):1-8)