مطالعه تجربي عفونت همزمان ويروس آنفلوانزاي H9N2 و باكتري اورنيتوباكتريوم رينوتراكيال در جوجه‌هاي SPF

Experimental study on co-infection of H9N2 avian influenza virus with Ornithobacterium rhinotracheale in specific- pathogen- free chickens

در اين مطالعه بيماريزايي عفونت همزمان ويروس H9N2 (A/chicken/Iran/m.1/2010) و باكتري اورنيتوباكتريوم رينوتراكيال (R87-7/1387 ORT-) و تمايل اين عفونت به بافت هاي مختلف و همچنين انتشار آن در بدن جوجه هاي نژاد لگهورن SPF، مورد بررسي قرار گرفت. همچنين علايم باليني و ضايعات كالبدگشايي در پرندگان مبتلا ارزيابي شد. چهل قطعه جوجه تفريخ شده از تخم مرغ جنين دار SPF در سن 21 روزگي به صورت تصادفي به دو گروه تقسيم شدند (20 قطعه در گروه آزمايش و 20 قطعه در گروه كنترل). در سن 3 هفتگي جوجه هاي گروه آزمايش، همزمان به روش قطره چشمي به ويروس H9N2 با عيار EID50 106 و باكتريORT به روش داخل ناي به مقدار CFU 10 10×1 آلوده شدند. نمونه گيري از بافت هاي مختلف در روزهاي 2، 4،6،8،10،12و14 بعد از آلوده سازي انجام شد. در اين مطالعه به منظور بررسي روند انتشار ويروس از روش جداسازي ويروس از طريق تلقيح به تخم مرغ هاي SPF جنين‌دار11 روزه و كشت باكتريايي از سوآب هاي اخذ شده بر روي محيط كشت آگار خوندار استفاده گرديد. جوجه هاي گروه آزمايش افسردگي، كم اشتهايي، ژوليدگي پرها، علايم شديد تنفسي و 15 درصد تلفات نشان دادند. بيشترين علايم باليني در روز 3 بعد از تلقيح مشاهده گرديد. باكتري ORT از سوآب ناي در روزهاي 2 و 4 پس از تلقيح و از ريه در روز 4 پس از تلقيح جداسازي گرديد. اما وجود باكتري در سوآبهاي كبد و قلب در طي كل دوره مطالعه رديابي نشد. ويروس آنفلوانزا در روزهاي 2 و 4 بعد از تلقيح در ريه و ناي جداسازي گرديد. همچنين ويروس در روزهاي 2 و 6 بعد از چالش در بورس فابريسيوس رديابي شد. ويروس تنها در روز 2 پس از تلقيح در نمونه هاي تيموس وكبد و روز 8 پس از تلقيح در كليه هاي پرندگان مبتلا جداسازي شد. درحاليكه در طي كل دوره مطالعه، ويروس در طحال، لوزه هاي سكومي و كلوآك يافت نشد. نتايج مطالعه حاضر نشان داد كه باكتري و ويروس به ترتيب از روزهاي 6 و10 پس از تلقيح از هيچ ارگاني جداسازي نشد و همچنين آلودگي همزمان ويروس H9N2 و باكتري ORT منجر به بروز علايم شديد باليني و ضايعات كالبدگشايي در جوجه‌هاي دچار عفونت شد..

In this study, pathogenesis of co-infection of (A/Chicken/Iran/ m.1/2010) H9N2 virus and (ORT -R87-7/1387) Ornithobacterium rhinotracheale bacteria, and tissue tropism and dissemination of this co-infection throughout the body of SPF chickens were investigated. The clinical signs and gross lesions of the infected chicks were also monitored. Forty, 21-day-old SPF chicks were divided randomly into two groups (20 chicks in the experimental and 20 chicks in the control group). At the age of three weeks, the chicks in the experimental group were inoculated by eye-drop with the virus of 106 EID50 and intratracheally with the bacteria of 1 1010×CFU. The samples from various tissues were collected at 2, 4,6,8,10,12 and 14 days post-inoculation (DPI). We used culture on blood agar for detection of the bacteria and isolation assay in embryonated chicken eggs (SPF) to evaluate virus dissemination. Experimental group chickens exhibited depression, reduced appetite, ruffled feathers, more severe respiratory signs and 15% mortality. The most remarkable clinical signs appeared on day 3 PI. H9N2 was detected in the lungs and trachea on days 2 and 4 PI. The virus was also found in the Bursa of fabricius on days 2 and 6 PI. The H9N2 virus was observed only on day 2 PI in Thymus and Liver, and only on day 8 PI in Kidneys. We could not trace the virus in the spleen, cecal tonsils and cloaca during study. ORT was isolated in the swabs of trachea on days 2 and 4 PI. The bacteria was also found in the lungs on day 4 PI.But ORT was not detected in swab samples taken from heart and liver during study. The Results of this study indicated that H9N2 virus and ORT bacteria was not detected from days 6 and 10 PI, respectively and also concurrent infectious with H9N2 virus and ORT bacteria could exacerbates clinical signs and gross lesions in infected chickens.